规范标准

动物结核病诊断技术标准

日期:10-24 作者:佚名- 小 + 大

3.2.2.3 将经过处理的标本接种到培养基上(同时作2~4份),培养一天后、以熔化的石蜡封口,继续培养。 3.2.2.4 牛型结核分枝杆菌比人型结核分枝杆菌生长要缓慢得多。初次培养牛型结核分枝杆菌时,需36℃一37℃培养5—8周方可出现菌落。在固定培养基上不产生任何颜色,菌落湿润、略显粗糙并发脆。加1%的丙酮酸钠能促进生长,但在噻吩—2酸肼(T2H)培养基(见附录C中C4)上不生长。

3.2.2.5 禽型结核分枝杆菌生长需要2~3周。形成湿润、弥漫状,光滑及星光状菌落。最适生长温度为40℃—42℃。在T2H培养基上生长。

3.2.2.6 人型结核分枝杆菌生长需要36℃~37℃培养3~4周。该菌落干燥、粗糙,呈白色、黄色或橙色。牢牢附着于培养基。在T2H培养基上生长。

3.2.2.7 非典型分杖杆菌生长快速,大部分(但不是全部)产生白色或具有橙色或黄色色素,常形成黄色或橙色菌落。某些种类的色素只有在亮处才显出。大多数非典型种类的生长速度比牛或人型结核分枝杆菌快。

3.2.3 动物试验

本试验是确诊结核病的主要依据,如能与涂片镜检和培养同时进行,则结果更为可靠。

3.2.3.1 试验动物在试验前,应进行牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验。 3.2.3.2 豚鼠对牛型和人型结核分枝杆菌敏感,对禽型结核分枝杆菌有抵抗力,常只能形成局部病灶。

3.2.3.3 家兔对禽型结核分枝杆菌高度敏感。对牛型结核分枝杆菌敏感。人型结核分枝杆菌虽可使其肺部形成少量病灶,但可趋于痊愈而不致死。

3.2.3.4 处理过的病料约lmL—3mL,皮下或肌肉或腹腔内注射,每份病料至少接种2只同种动物。接种后30d左右,进行禽型结核分枝杆菌PPD和牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验,如有阳性反应,可剖检其中的半数动物进行病理学观察、细菌培养和涂片镜检。另一半继续观察至3个月内剖检观察。如果为阴性反应,可于40d左右剖检其中的半数,观察病理学变化、细菌培养和涂片镜检,另一半继续观察至3个月再剖检观察。

3.2.4 牛型、禽型和人型地结核分枝杆菌鉴定方法见附录D(提示的附录)。

4 结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

4.1 牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

用结核分枝杆菌PPD进行的皮内变态反应试验对检查活畜结核病是很有用的。该试验用牛型结核分枝杆菌PPD进行。

4.1.1 牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

出生后20d的牛即可用本试验进行检疫。

4.1.1.1 操作方法

a)注射部位及术前处理:将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前一天剃毛),三个月以内的犊牛,也可在肩肿部进行,直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度,作好记录。注意,术部应无明显的病变。

b)注射剂量:不论大小牛只,一律皮内注射0.1mL(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后,皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。

c)注射方法:先以75%酒精消毒术部,然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD,注射后局部应出现小疱,如对注射有疑问时,应另选15cm以外的部位或对侧重作。

d)注射次数和观察反应:皮内注射后经72h判定,仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应,并以卡尺测量皮皱厚度,作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射,再经72h观察反应结果。

对阴性牛和疑似反应牛,于注射后96h和120h再分别观察一次,以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。 4.1.1.2 结果判定

a)阳性反应:局部有明显的炎性反应,皮厚差大于或等于4.0mm。

b)疑似反应:局部炎性反应不明显,皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm。

c)阴性反应:无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。

凡判定为疑似反应的牛只,于第一次检疫60d后进行复检,其结果仍为疑似反应时,经60d再复检。如仍为疑似反应,应判为阳性。

4.1.2 其他动物牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

参照牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行。

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