动物结核病诊断技术标准
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3.2.2.3 将经过处理的标本接种到培养基上(同时作2～4份)，培养一天后、以熔化的石蜡封口，继续培养。 3.2.2.4 牛型结核分枝杆菌比人型结核分枝杆菌生长要缓慢得多。初次培养牛型结核分枝杆菌时，需36℃一37℃培养5—8周方可出现菌落。在固定培养基上不产生任何颜色，菌落湿润、略显粗糙并发脆。加1％的丙酮酸钠能促进生长，但在噻吩—2酸肼(T2H)培养基(见附录C中C4)上不生长。 3.2.2.5 禽型结核分枝杆菌生长需要2～3周。形成湿润、弥漫状，光滑及星光状菌落。最适生长温度为40℃—42℃。在T2H培养基上生长。 3.2.2.6 人型结核分枝杆菌生长需要36℃～37℃培养3～4周。该菌落干燥、粗糙，呈白色、黄色或橙色。牢牢附着于培养基。在T2H培养基上生长。 3.2.2.7 非典型分杖杆菌生长快速，大部分(但不是全部)产生白色或具有橙色或黄色色素，常形成黄色或橙色菌落。某些种类的色素只有在亮处才显出。大多数非典型种类的生长速度比牛或人型结核分枝杆菌快。 3.2.3 动物试验 本试验是确诊结核病的主要依据，如能与涂片镜检和培养同时进行，则结果更为可靠。 3.2.3.1 试验动物在试验前，应进行牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验。 3.2.3.2 豚鼠对牛型和人型结核分枝杆菌敏感，对禽型结核分枝杆菌有抵抗力，常只能形成局部病灶。 3.2.3.3 家兔对禽型结核分枝杆菌高度敏感。对牛型结核分枝杆菌敏感。人型结核分枝杆菌虽可使其肺部形成少量病灶，但可趋于痊愈而不致死。 3.2.3.4 处理过的病料约lmL—3mL，皮下或肌肉或腹腔内注射，每份病料至少接种2只同种动物。接种后30d左右，进行禽型结核分枝杆菌PPD和牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验，如有阳性反应，可剖检其中的半数动物进行病理学观察、细菌培养和涂片镜检。另一半继续观察至3个月内剖检观察。如果为阴性反应，可于40d左右剖检其中的半数，观察病理学变化、细菌培养和涂片镜检，另一半继续观察至3个月再剖检观察。 3.2.4 牛型、禽型和人型地结核分枝杆菌鉴定方法见附录D(提示的附录)。 4 结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验 4.1 牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验 用结核分枝杆菌PPD进行的皮内变态反应试验对检查活畜结核病是很有用的。该试验用牛型结核分枝杆菌PPD进行。 4.1.1 牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验 出生后20d的牛即可用本试验进行检疫。 4.1.1.1 操作方法 a)注射部位及术前处理：将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前一天剃毛)，三个月以内的犊牛，也可在肩肿部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意，术部应无明显的病变。 b)注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射0.1mL(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。 c)注射方法：先以75％酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小疱，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。 d)注射次数和观察反应：皮内注射后经72h判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射，再经72h观察反应结果。 对阴性牛和疑似反应牛，于注射后96h和120h再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。 4.1.1.2 结果判定 a)阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm。 b)疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm。 c)阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。 凡判定为疑似反应的牛只，于第一次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检。如仍为疑似反应，应判为阳性。 4.1.2 其他动物牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验 参照牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行。 |
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