规范标准

动物结核病诊断技术标准

日期:10-24 作者:佚名- 小 + 大

3.1.5粪便

有肠结核可疑时,可采集粪便进行细菌学检查,患肺结核的牛只,有时在粪便中亦可检出结核分枝杆菌。因牛常将痰液吞咽至消化道内,随粪便排出。尽量采集混有粘液或脓血的粪便。

取粪便30g,加15%~20%安替福民溶液15mL和蒸馏水55mL,混合,经2h~3h后,3000r/min~4000r/min离心30min,倾去上清液,加10mL蒸馏水于沉淀物中,将此液用纱布过滤后接种于豚鼠皮下,经1.5~2个月后剖检。

或将粪便加2倍量灭菌蒸馏水磨碎,然后加氯化钠至饱和。当液体中残渣沉淀后(液体完全澄清),浮起的薄膜含有大量的结核分枝杆菌。取出薄膜,用等量的4%氢氧化钠(见附录A中A2)充分混合,置37℃中3h,然后离心,取沉淀物用8%盐酸中和后,即可作染色镜检、培养和动物试验。

粪便中如有粘液或脓血,可挑取粘液脓血选用任何一种消化液处理后检验。

如系纯粪便,取5g~l0g,加生理盐水约3~4倍混合后,用细铜纱网过滤,取滤液置室温中自然沉淀,然后取上层悬液置于另一大离心管或烧杯内,加消化液约3~4倍量,置37℃温箱lh~2h,同上法处理后检验。

3.1.6组织器官

尽量采集有结节病灶的部位。猪易患颈部淋巴结结核,亦易患肠系膜淋巴结核,且常呈钙化或干酪样病变。家禽常在肠、脾、肝发生结核病灶,有时亦可见于肺或卵巢。

病变组织需先研磨,制成乳剂,通常取组织乳剂或其他液状病料2mL~4mL,加入等量的5%氢氧化钠溶液,充分振摇5min~10min,或摇至发生液化为止,液化后经3000r/min~4000r/min离心15min~30min,沉淀物加1滴酚红作指示剂,以2mol/L盐酸中和至淡红色后,作染色镜检、培养和动物试验。

如病料为脓状或干酪状或钙化的结节病灶组织,可直接作染色镜检,往往可以检出众多的结核分枝杆菌。但得到阴性结果时,应浓缩处理后检验。

3.2 检验方法

3.2.1 染色镜检

3.2.1.1 涂片

先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白(鸡蛋白20mL,甘油20mL,水杨酸钠0.4g,混匀)然后吸取标本滴加其上,涂布均匀。

如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料,在涂片制成后,可先用二甲苯或乙醚滴加覆盖于涂片之上,经摇动lmin~2min脱脂后倾去,再滴加95%酒精以除去二甲苯,待酒精挥发后即可染色。

3.2.1.2 染色

染色液配制方法见附录B(标准的附录)。

萎—尼氏抗酸染色:处理过的被检材料涂片后,经火焰固定,加苯酚复红染色液(见附录B中B1)覆盖,将玻片在火焰上加热至出现蒸汽(不能产生气泡),如此热染5min(如染色液干涸,须加适量补充)。水洗后滴加3%盐酸酒精(见附录B中B2)脱色30s~60s(至无色素脱下为止)。水洗后,以骆氏美蓝染色液(见附录B中B3)复染lmin。水洗,吸干,镜检。抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色,其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成蓝色。

3.2.1.3 镜检

结核分枝杆菌在显微镜下呈细长平直或微弯曲的杆菌,长1.5um~5um,宽0.2um~0.5um,在陈旧培养基上或干酪性淋巴结内的菌体,偶尔可见长达l0um或更长。

3.2.2 培养

3.2.2.1 培养基配制方法见附录C(标准的附录)。

3.2.2.2 被检标本经消化浓缩后吸取其沉淀物作为培养材料。初次讣离,可用配氏培养基(见附录C中C1)、L—J培养基(见附录C中C2)或青霉素血液琼脂培养基(见附录C中C3)。

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