兽医图谱

猪瘟防治技术(图)

日期:12-11 作者:阳光兽医- 小 + 大

   六、诊断鉴别
  流行病学、临诊症状及病理变化等方面具有重要的诊断价值。但由于现在猪病种类繁多,且常常以非典型状态出现,甚至呈隐性感染,确诊猪瘟必须对病猪或特异性抗体进行实验室检测。一旦发现疑似猪瘟时,首先要采集病料,送往有关的实验室做抗原的确诊。现将几种主要的实验室诊断方法介绍如下:
  (一)动物接种检测猪瘟病毒的敏感方法,应用易感的幼龄猪(10~20kg体重)进行接种试验。取病料或新鲜猪尸的血液或组织乳剂,肌肉注射接种1~2头幼猪。试验猪应事先进行血清中和试验,以排除有过猪瘟病毒或牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染。如果幼猪在接种后6~7天停食或体温升高,则立即采血分离病毒。幼猪发病死亡后,立即采取扁桃体、脾脏、淋巴结、肾脏等做病毒分离。如果幼猪在接种后21天不发病或发病后康复,则采血测定血清的中和抗体效价,并用强毒进行攻毒试验。从血液或组织中可分离到猪瘟病毒,被接种的幼猪产生中和抗体,对强毒攻击表现免疫性,即可判为阳性。相反,幼猪不发病,不产生中和抗体,对强毒攻击有易感性,则判为阴性。如果幼猪发病或死亡,但未分离出猪瘟病毒也不产生中和抗体,则应考虑其他病原感染的可能性。由于普遍存在低毒力的病毒株,所以被接种幼猪即使不呈现猪瘟症状,也应进行血液中的病毒分离试验。
  (二)免疫荧光试验主要用于检测病毒抗原,是目前国内外实验室诊断猪瘟的最常用方法,结果直观、可靠。特别是在疫情初起必须查清病原、检疫及以猪场猪瘟净化时,此种检测方法尤为重要。
  进行免疫荧光试验时,将待检病猪的扁桃体、肾脏、淋巴结、脾脏等组织的冰冻切片或抹片,或待检细胞培养片,经丙酮固定后,滴加猪瘟荧光抗体覆盖于切片、抹片或细胞片表面,置37℃作用30min,然后用磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2,0.01mol/L)洗涤,自然干燥后置荧光显微镜下观察。必要时,设立抑制试验染色片,以鉴定荧光的特异性。在荧光显微镜下,见切片、抹片或细胞培养物(细胞盖片)中有胞浆荧光,并由抑制试验证明为特异性荧光,判为猪瘟阳性反应;无荧光判为阴性反应。
  必须指出,牛病毒性腹泻病病毒与猪瘟存在共同抗原性,因此,牛病毒性腹泻病病毒也能结合猪瘟荧光抗体。但因牛病毒性腹泻病病毒对猪并无明显的病原性,也不能在猪体内充分增殖,因此不至于干扰诊断结果,且因牛病毒性腹泻病病毒可在细胞培养物上引起细胞病变,鉴定并不困难。
  (三)中和试验血清中和试验可以检出动物体内的抗体,但因推广应用弱毒疫苗,猪群中的猪瘟抗体滴度普遍较高,故应进行双份血清的检查(前后期相差14天以上),才能确立抗体滴度增高与感染患病的关系。
  目前最常应用的血清中和试验方法是免疫荧光中和试验,即用定量病毒加不同稀释度的被检血清进行试验。同时以SPF猪血清作为阴性对照,以猪瘟高免血清作为阳性对照。所有试验血清均经56℃灭活30min后,按下列步骤进行:用含0.5%乳白蛋白水解物和0.025mol/L的MgCl2•6H2O(即每1000mL中含有5.07g)的Earle氏液稀释病毒和被检血清。被检血清按4倍连续稀释法稀释,由1:4至1:1024。取不同稀释度的血清分别和等量病毒液混合,置37℃感作1h,随后接种飞片上的PK-15细胞培养物。同时设置各种对照组。再培养18~24h,取出后做免疫荧光抗体检查。计数各飞片中荧光细胞灶的数目。与对照组相比较,凡能减少90%荧光细胞灶的血清稀释度就是该血清的终点滴度。1:4血清组的荧光细胞灶减少不到90%者,判为阴性。
  (四)琼脂扩散试验虽可选用病猪的脾、淋巴结和肠段为病料制备抗原,但以胰腺最好。另需要具备特异性好的猪瘟高免血清。本法操作简单,但敏感性较低,肯定是猪瘟病例的阳性检出率也低于50%。欧洲一些国家,如英国的某些诊断实验室专门制备高价免疫血清和抗原,并有统一的判定标准。
  用pH8.6的巴比妥缓冲液配制1.2%琼脂,内加万分之一柳硫汞防腐。按中央1孔,周围6孔的模式打孔。孔径5mm,孔间距6mm。检测抗原时,将高免血清滴人中央孔内,周围孔内分别滴加标准抗原和待检病料乳剂。检测抗体时,将标准抗原滴人中央孔内,周围孔上、下2孔内滴加高免血清,其他4孔分别滴加被检血清。

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