鸡传染性支气管炎诊断技术研究进展

摘要：鸡传染性支气管炎（avian infectious bronchitis，IB）具有极强的传染性，为我国二类动物疫病。IB的准确诊断对其防控具有极其重要作用。本文综述了病毒分离、血清学诊断、免疫组织化学技术、分子生物学诊断、蛋白芯片技术等主要的IB诊断方法。病毒分离是诊断IB的重要手段，但其耗时长且对操作有一定要求，因此近年来将其与基因测序分析相结合来进行IB诊断及基因型鉴别；在常规血清学方法中，酶联免疫吸附试验（ELISA）和血凝抑制试验（HI）是推荐用于鸡群大规模筛查及免疫效果评价的方法，病毒中和试验（VNT）具有高度特异性，常被应用于毒株的变异鉴定，但是耗时且缺乏标准化，建议选用更成熟的ELISA方法；随着分子生物学技术的发展，聚合酶链式反应（PCR）因具有更高的准确性，且能实现实时定量分析，已被广泛应用于实验室检测；重组聚合酶等温扩增技术（RPA）特异性好，对试验条件要求不高，适用于养殖场的大规模IB筛查。另外，蛋白芯片技术、免疫层析试纸条、鸡声信号分析装置也为IB诊断提供了全新的思路。

鸡传染性支气管炎（avian infectious bronchitis，IB）是目前影响家禽养殖的重要疾病之一，能造成鸡死亡，蛋鸡产蛋量下降，肉鸡饲料转化率降低，具有极强的传染性，为我国二类动物疫病。IB是由冠状病毒科γ冠状病毒属传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）引起的，以呼吸道、生殖道以及肾脏发生病变为主的急性高度接触性传染病。IBV除了能感染不同日龄的鸡外，也能感染火鸡、鸭、孔雀、鸽子、鹌鹑等。20世纪80年代以来，IB已经在我国广泛流行，特别是在鸡养殖密集型地区，且流行的病毒基因型呈现多样性和复杂性。本文综述了IB的流行病学、临床症状和剖检特征，以及近年来在诊断技术方面的研究进展，以期为IB的诊断提供一定的参考。

1 流行病学

IBV自1931年被首次报道至今，已经在全球流行传播。对全球176个国家的禽病调查发现，IBV造成的禽类死亡数仅次于高致病性禽流感。IBV主要通过空气传播，也可通过接触病禽及其排泄物以及受污染的物品传播流行。当外界环境温度较低时，圈舍较封闭，空气流通慢，此时易造成IBV大范围传播。因此，每年10月到次年4月是IB的高发期。

IBV复制所需的RNA聚合酶无校对功能，因而在其复制过程中容易发生基因突变、缺失、重组或外源基因插入，导致IBV不断变异并出现了众多的基因型和血清型。目前我国流行的主要毒株为QX（GI-19）、4/91（GI-13）、TW（GI-7）、MASS（GI-1），其中QX是优势毒株。我国的IBV流行具有明显的地域性特征，主要流行于禽类养殖较为密集的中东部和南方地区。流行病学调查发现，我国南方和华中地区商品鸡养殖场普遍存在多个基因型IBV毒株，包括重组毒株，其中QX、TW、4/91是最常见的基因型，而TW流行呈上升趋势。

2 临床症状及剖检特征

所有日龄的鸡均能感染IBV，潜伏期一般为18~36 h，其中30日龄以内的鸡发病率高，随着日龄的增加发病率随之降低。IBV还会诱发其他疾病进而导致死亡率增加。感染IBV的病鸡表现为精神萎靡、流泪、羽毛蓬乱、采食量减少、大量饮水、腹泻，根据症状的差异，被分为肾型、呼吸道型、生殖型。该病主要影响呼吸道和生殖系统。近年来，我国肾型病例发病率有所上升，且病毒毒力和传播能力更强。

呼吸型主要表现为呼吸道炎症，包括气管啰音、流鼻涕、咳嗽、喘息、打喷嚏，剖检见气管黏膜和支气管黏膜充血并伴有大量的黏液和气泡；生殖型主要表现为产蛋量下降、蛋品质下降（畸形、软壳、蛋黄水状），剖检见输卵管损伤、腹腔内卵黄液聚集；肾型剖检常见肾脏苍白肿大、肾炎、尿酸沉积、坏死。此外，法氏囊、哈德氏腺、肺脏、脾脏、腺胃、肠道、睾丸也是IBV复制的场所，因此会表现出不同程度的病变，如法氏囊肿大、脾脏充血、腺胃出血性溃疡、附睾结石等，往往表现出复杂的混合症状。IB的临床症状与禽流感（avian?influenza，AI）、新城疫（Newcastle disease，ND）、传染性喉气管炎（infectious?laryngotracheitis，ILT）的症状有一定的相似性，因此需借助实验室手段进行确诊。

3 诊断方法

3.1 病毒分离鉴定

病毒分离是诊断IB的重要手段。由于支气管是IBV感染的主要部位，且1周内会达到病毒滴度的峰值，因此对疑似患病鸡要及时采集气管拭子或新鲜气管组织进行病毒分离。肾脏、腺胃、输卵管、泄殖腔、盲肠扁桃体也是重要的采样部位。鸡胚接种是分离IBV的首选方法，其缺点是只有连续传3代以上才会出现特征性病变——胚胎卷曲和萎缩，但这并不能作为确诊的依据，还需进一步依靠血清学方法或分子生物学方法确诊。尽管鸡胚肾成纤维细胞、肾上皮细胞和Vero细胞已经被应用于分离IBV，但是并不是所有的IBV毒株都能通过细胞培养被分离。器官培养也是一种重要的分离手段，气管环样品是优先选择。随着IBV的复制，纤毛运动逐渐减弱，因此显微镜下观察到纤毛运动停止是判定IBV为阳性的重要依据，但是也可能会出现假阴性。病毒分离耗时且对操作环境有一定的要求，因此该方法并不适用于常规诊断，主要用于减毒疫苗研发、测序前病毒浓度提高、致病力测试、疫苗保护力研究等。

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