非洲猪瘟抗体“假阳性”的解决方案

随着非洲猪瘟病毒潜伏期的延长和致病力的减弱，对异常猪核酸检测的效率在下降，需要结合抗体检测在引种监测、正常猪群监测预警甚至定点清除等多个环节中提供决策依据。但在抗体检测时频频出现假阳性，这让决策者左右为难。本文根据现场表象、试剂盒原理及抗体动力学规律等就假阳性产生的原因和辨别假阳性的措施进行经验分享，希望有助于兽医科学决策。

一、假阳性常常出现的场景和现象

（1）血液样本在出现溶血、胶冻状或存在败血症时容易出现假阳性，其检测的抗体数值大多为可疑或刚突破阴阳性判定阈值。

（2）抗凝血样本分离血浆后用于检测抗体可能易出现假阳性（注：临床中存在采用抗凝血进行抗原和抗体双检测的实践。即采集的抗凝血离心，血细胞用于核酸检测，其检测核酸的敏感性确实会升高；将抗凝血分离的血浆进行抗体检测，虽然这可避免二次采集全血的麻烦，但这种血浆在检测抗体时容易出现假阳性）。

（3）检测用的洗涤用非去离子水，检测时出现假阳性。

（4）有些样本的检测数值往往是刚刚超出阴阳性判定线，但间隔几天后重复采样复测后抗体检测的数值不再上升或判定结果又为阴性。

（5）将两份以上的血清样本合样后进行检测，合样后其检测数值升高，合样后的样品结果为阳性，但分别检测单个样本，每个样品抗体判定又是阴性。

表1 两份样本合样后的样本和分别检测每个样本时抗体数值

二、假阳性出现的原因解析

假阳性可能有以下三方面原因

（1）核酸检测方法多针对的是个体定性，而抗体检测方法多针对的是群体检测的数据分析。在特异性这个指标上，核酸检测试剂往往比抗体检测试剂的标准更高。

（2）在非洲猪瘟抗体检测中阻断法或竞争法比间接法更易出现假阳性（注：从其他检测试剂的数据反馈和原理上，间接法应该比竞争法更易出现非特异性反应。但在试剂检测工作中，非洲猪瘟抗体检测中竞争法的假阳性比例更高。但我们不能以这个指标就去简单用于判定试剂盒的优劣，其假阳性发生率应该与试剂盒阴阳性阈值的标准、样本中的干扰因素有关，这需要对检测数据进行统计分析，得到实验室经验的预警值，下文中将会作展示和阐述）。原因可能是阻断法往往是针对单个抗原表位，该表位一旦被封闭，阻碍了该表位与最终显色的二抗的结合，由于阻断法或竞争法是二抗结合越少，判断其抗体效价越高（见图1原理解析），因此容易产生假阳性。表位被非特异性结合可能出现在以下原因中：

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