非洲猪瘟实验室检测技术研究进展

2 血清抗体检测

2.1酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA方法是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种敏感性很高的技术，是目前血清检测最常用的方法。1990年，Pastor等将经过处理后获得CS-P为包被抗原，建立了间接ELISA抗体检测方法,首次检测到抗体的时间为感染后7d，适用于ASFV感染的早期检测，该方法也是OIE推荐的方法。2012年，董志珍等利用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫小鼠获得单克隆抗体，使用该单克隆抗体，建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA，建立的ELISA竞争法特异性高，无交叉反应，灵敏度高于间接免疫荧光法。2016年，曹琛福利用原核表达系统表达的重组P54蛋白，建立了ASFV抗体竞争ELISA方法，该方法特异性强，达到100%，灵敏度高，可达96.22%；与西班牙INGENASA公司生产的检测非洲猪瘟竞争ELISA试剂盒的符合率可达到98.13%。由于ASF尚无疫苗，ELISA方法不仅适用于大规模的血清学筛查，对于单个阳性血清样品敏感性也较高，已经广泛应用于ASF的流行病学监测和根除计划。目前，用于ASFV抗体检测的有间接ELISA和阻断ELISA，并且有特异性和敏感性高的成熟试剂盒。

2.2间接免疫荧光试验（IIF）

1970年，Sanchez等首先建立了ASFV 抗体的IIF检测技术，IIF敏感性高，检测时间短，当ELISA检测结果不确定或制备抗原困难复杂时，可以使用此方法。但由于在反应中受多种因素的影响，容易产生非特性的染色，影响结果的判断。

2.3胶体金免疫层析技术

2017年,林彦星等根据ASFV的VP73蛋白，合成多肽并与牛血清白蛋白（BSA）偶联，筛选出有抗原性的多肽作为试纸条检测线的包被抗原，制备出快速检测ASFV 抗体的胶体金免疫层析试纸条。所制备的试纸条特异性强、敏感性高、稳定性好和操作简便，与ELIA检测结果的符合率达到100%，可用于ASFV 抗体的快速检测和流行病学调查。

3 展望

ASF的诊断应根据流行病学、临床症状和病理特点作出初步判断，再根据实验室诊断结果进行确诊。ASF的早期诊断和确诊都要依赖于实验室的结果。当前，我国正处在防控ASF的关键时期，农业农村部要求屠宰场、猪肉加工企业加强非洲猪瘟的自检，职能部门加强监督抽检，确保猪和猪肉产品的质量安全，各级的实验室要根据实际情况，选择适合检测方法，做到快速、准确和简便，做到早发现、早处理，防止疫情的扩散。

本文作者：东莞市动物疫病预防控制中心，张险朋

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