猪伪狂犬病(Aujeszky's disease,AD;Pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(AD virus,ADV;PR virus,PRV)引起的猪的急性传染病,病猪、带毒猪以及带毒鼠类为该病的重要传染源,猪只感染后终身带毒,在应激因素的影响下,阳性猪只能排毒,传染其他猪只。该病主要引起种猪的繁殖障碍以及仔猪死亡率增高,育肥猪生长缓慢,给生产带来很大影响。近年来通过gE基因缺失疫苗的使用,配合鉴别诊断、淘汰阳性猪只等综合性措施,越来越多的国家成功地根除了该病并持续保持无疫状态。为贯彻落实国务院发布的《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》对疾病净化的相关要求,防止动物疫病传播扩散,保障动物产品质量安全,国内各规模猪场逐步开展了猪伪狂犬病净化工作。 猪伪狂犬病防控与净化的难点包括且不限于阳性稳定场切断感染循环、母源抗体的干扰,免疫程序制订、引种风险、应激影响以及不正确的免疫操作等。在猪伪狂犬病病毒的清除计划中,最常用的方法有三种,即检测淘汰、后代隔离饲养以及清群/建群,三种方法各有利弊,单纯地依靠一种方法来完成猪伪狂犬病净化目前在我国很难实现。规范的饲养管理,严格的生物安全,以及有效的疫苗免疫防控措施,配合猪场正常的母猪淘汰,通过陆续猪伪狂犬病引入野毒阴性的后备猪来逐步淘汰阳性种猪群,始终保持阴性猪群不转阳,并且阻断育肥猪再次感染,切断猪伪狂犬病病毒在猪场内的循环,是现阶段最适合我国大多数猪场进行净化的一种方法。 本研究在猪伪狂犬病gE抗体为阴性的猪场,通过完善免疫程序,改善gB抗体和中和抗体水平。为了全面、系统、科学评估各阶段猪群猪伪狂犬病真实抗体水平,本研究中不仅使用了常规的ELISA和荧光PCR检测gB、gE抗体以及猪伪狂犬病病原以外,还采用了中和抗体检测作为重点观测指标做对比分析,以期有效指导制定合理的免疫程序,有效防控猪伪狂犬病病毒。 1 材料与方法 1.1 试验动物 湖南某规模化养殖场,基础母猪1 500头,将其生产母猪、仔猪及生长育肥猪作为研究对象。 1.2 试验材料 (1)猪伪狂犬病毒Bartha K61毒株活疫苗、灭活苗,由试验猪场购自西班牙海博莱公司,活疫苗、灭活疫苗肌注均为2 mL/头份,喷鼻活疫苗1 mL/头份。 (2)猪伪狂犬病gB、gE抗体试剂盒购自美国IDEXX公司,按照试剂盒说明书进行操作检测。 (3)由湖南农大提供猪猪伪狂犬病病毒变异毒株毒种进行中和抗体检测,滴度为107.7 TCID50/mL。 (4)一次性注射器,一次性使用静脉采血针,普通采血管,棉签,1.5 mL EP管,生理盐水等。 1.3 猪伪狂犬病控制与净化的实施思路与具体措施1.3.1 实施思路 猪伪狂犬病净化方案由6个不同阶段组成,即:调查阶段、强化免疫控制、检疫淘汰、全部或部分清群、监测认证阶段和维持阶段。 净化前调查和评估:按照种母猪群数量的10%采血,分离血清,用gE-ELISA检测,根据野毒抗体阳性率高低,确定种猪群猪伪狂犬病野毒感染状态。1)如果所抽检样品全部为gE抗体阴性,则种猪群全群逐头检测,如所有血清样品均为阴性,可确认种猪群为猪伪狂犬病野毒抗体阴性,直接进入“监测与认证”阶段;2)如果血清样品的gE抗体阳性率低于10%,可进入“检测淘汰”—“监测与认证维持” 的净化方案;3)如果gE抗体阳性率大于10%,可实行“强化免疫控制”—“检测淘汰”—“监测与认证维持”的净化方案。 1.3.2 具体措施 (1)试验猪场按表1对各阶段猪只进行猪伪狂犬病免疫。
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