感染鹅星状病毒的雏鹅,除了尿酸生成增多外,尿酸的排泄也出现障碍。排泄尿酸的主要器官是肾脏,其中发挥主要作用的转运蛋白有NaK-ATP泵和耐药相关蛋白4等。有研究报道,雏鹅感染鹅星状病毒后耐药相关蛋白4的表达量显著降低,Na-K-ATP泵的活性也会降低,这就使肾脏排泄尿酸的能力减弱[9]。更重要的一点是,雏鹅感染鹅星状病毒的主要靶器官为肾脏,该病毒侵入机体后对肾脏造成严重的病理损伤,并且当肾脏中有大量尿酸盐沉积时,这些结晶与巨噬细胞作用会激活机体内一系列的炎性因子,从而诱发肾脏严重的炎性损伤。这些均导致肾脏对尿酸的排泄能力下降。 5 检测方法 5.1 病毒分离鉴定 病毒分离鉴定为最传统的检测方法,虽检测时间较长及成本较高,但对于很多传染病的检测却是金标准。采集具有典型症状的发病雏鹅脾脏、肝脏和肾脏等组织,将组织放入研钵中一边加入缓冲液一边进行研磨,收集研磨后的液体反复冻融,离心收集上清液用以接种鹅胚进行传代培养,除鹅胚外也可用相应的细胞进行病毒分离。已有很多研究团队通过传代培养分离出鹅星状病毒,并通过动物致病性试验,若症状与发病雏鹅相同[10,11],即确诊为鹅星状病毒感染。 5.2 电镜观察 电镜观察是检测病毒最直接的方法之一,分离纯化后的病毒用电镜观察,观察到形态为星形且大小在28~30 nm的病毒粒子即可确诊,但也有研究发现,病鹅肝脏内的病毒粒子为30 nm,但并未见星状形态[12]。所以该方法对病原检测的特异性还有所欠缺,可作为其它方法的辅助检测技术。 5.3 分子生物学检测方法 分子生物学检测方法可对病原进行快速、准确的检测。杨颖等[13]根据鹅星状病毒变异株的ORF1a基因和新型鹅星状病毒的ORF2基因设计特异性引物,建立了可同时检测2种鹅星状病毒的RT-PCR检测方法,具有较好的灵敏度,最低检测量分别为1.70×103拷贝/μL和1.71×103拷贝/μL,与其它病毒无交叉反应。马水峰等[14]根据新型鹅星状病毒的ORF2基因设计特异性引物,建立了新型鹅星状病毒荧光定量PCR方法,检测灵敏度为1.087×101拷贝/μL,灵敏度高,与其它病毒无交叉反应。曾杏梅[15]根据鹅星状病毒ORF2基因设计环介导等温扩增引物,建立了鹅星状病毒LAMP检测方法,反应温度为58℃,反应时间为40 min,最低检测浓度为1×10-14μg/μL病毒核酸,与其它鹅源病毒无交叉反应。 5.4 免疫学检测方法 目前已有学者制备出鹅星状病毒的单克隆抗体及多克隆抗体[16,17]。佟贺等[18]通过大肠杆菌表达鹅星状病毒1型衣壳蛋白VP70,以此包被酶标板,建立检测鹅星状病毒1型抗体的间接ELISA,此方法可特异敏感地检测出鹅星状病毒1型。免疫学检测方法的建立非常重要,如ELISA方法可检测血清中抗体,可用于鹅星状病毒的流行病学调查,也可监测疫苗的免疫效果。 6 小结 近几年,我国多省养鹅地区暴发鹅星状病毒病,目前尚无商品化疫苗对该病进行预防,对我国养鹅业造成巨大经济损失。我国现流行的Go Ast V分为两个基因型组群,存在着遗传多样性,且随时可能进一步突变。关于鹅星状病毒感染导致雏鹅痛风的致病机制并不完全清楚,病毒编码的某些结构蛋白和非结构蛋白,对于感染宿主细胞的功能和作用尚不明确,需要进一步的研究。 【参考文献】略 |
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