非洲猪瘟的诊断和防治研究进展

3  免疫预防

3.1 非洲猪瘟疫苗

到目前为止，仍然缺乏安全有效的抗ASF疫苗，同时缺乏对ASFV足够敏感且不会在ASFV基因组内进一步进行遗传适应的永久性细胞系，这严重阻碍了大多数候选疫苗的生产。疫苗的开发似乎仍然是可行的，因为暴发急性ASF后康复的猪对密切相关的ASFV毒株的挑战性感染具有免疫力。影响疫苗开发的原因部分是由于感染猪产生的抗体不能真正使病毒失去活力(未能完全中和)。此外，许多对建立良好免疫应答很重要的成分在定位和功能上尚未完全被确定，因此，根据个别成分或通过载体表达的抗原生产疫苗具有挑战性。灭活的病毒制剂没有产生实质性的保护作用，不过接种的猪产生了针对ASFV的抗体。最后，还应指出的是，ASFV能够建立复杂的免疫调节和有效的免疫逃避机制，也就是说，它会产生许多能够影响宿主免疫系统的物质，从而使病毒有效地复制。

随着ASFV大范围传播，相关研究机构加强了疫苗的研究与开发，并取得了一些非常有希望的结果。ASFV疫苗可能比其表面上的研究进展更接近成品。

鉴于最近几篇综述总结了设计安全高效的ASF疫苗的方法，以下将重点介绍ASF疫苗开发的总体情况、最近发表的论文和进展，以及一些被忽视的问题。

3.2 减毒活疫苗

减毒活疫苗可以以毒力自然减弱的ASFV毒株或通过敲除毒力因子导致毒力削弱的毒株为疫苗株。有些疫苗制作工艺是对自然产生的毒株进行合理的改进。

第一批疫苗生产工艺在20世纪60年代就已获得了许可。这些早期活疫苗是基于减毒的ASFV毒株，并于20世纪60年代在葡萄牙和西班牙的野外条件下使用了数千次。不幸的是，许多免疫猪在接种疫苗几个月后出现了机体功能衰弱和慢性病变，并导致两个国家的发病猪增加。最后，疫苗回收，停止了现场使用。这一经验解释了为什么今天需要对ASFV疫苗候选株的安全性进行非常仔细的检查。ASFV疫苗设计不应仓促解决。

从20世纪70年代到90年代，俄罗斯进行了通过合理选择减毒株开发紧急疫苗(接种屠宰场和安全处理厂的待宰猪)的研究。根据红细胞吸附抑制(haemadsorption inhibition)和免疫生物学试验确定的特性和血清免疫类型，对ASFV的几种毒株进行了测试和分类。总之，大多数候选毒株仍会诱发接种猪出现相当长的病毒血症和轻微的发热反应。即使在较长的时间之后，疫苗也会产生较高的保护作用，但免疫作用并不完全，特别是当接种猪的免疫力较低时。

另外，ASFV自然发生的减毒毒株的变异株也被作为候选疫苗株进行了测试。最近，Zani和Gallardo等在波罗的海分离到了这种毒株。在Gallardo等报告初步试验结果后，Barasona等测试了野猪口服接种ASFV Lv17/WB/Rie1株(在西班牙获得专利，专利号为PCT/2018/000069)后的安全性和免疫效果。该毒株为截短的CD2v蛋白(EP402R基因)，不具有红细胞吸附(non-haemadsorbing)性。在对野猪进行免疫-攻毒试验的测试环境中，可以观察到，大多数接种疫苗的野猪和一头早期感染ASFV疫苗株的对照组野猪的体温略有升高，这是唯一观察到的临床症状。用qPCR方法检测，发现部分野猪体内含的ASFV载量很低。在疫苗接种期，大多数接种疫苗的野猪和所有早期接触的对照组野猪都产生了抗ASFV的抗体，证明ASFV疫苗株具有免疫原性和传播性。用野毒株攻毒后，在12头接种疫苗的野猪中，11头猪对致命的攻毒产生了免疫保护(92％)，发生急性ASF的野猪是免疫后没有产生抗体或接种疫苗后体温升高的猪。总之，该结果令人感到前景光明，但仍然缺乏关于疫苗的保护作用、安全性和无害性的更精确数据。Gallardo等在早期对同一毒株进行的研究中发现，至少有一头猪发生了关节肿胀和病变，这表明可能发生了慢性病。此外，疫苗毒株的传播可能会对受影响地区的人群和所在国家产生有利或不利的影响。这种毒株的优势在于它的非转基因特性。

最有希望成为ASFV疫苗株的候选者是通过同源重组产生的基因缺失突变体。Bosch-Camós等利用这种方法，已经对ASFV的几种毒株合理地敲除了毒力基因和干扰素抑制因子(interferon inhibitors)。敲除的毒力相关基因包括9GL(B119L)、UK(DP96R)、CD2v(EP402R)、DP148R，以及多基因家族(multigene families，MGF)的不同成员。沿着这些思路，敲除不同的I型干扰素抑制因子会产生毒力减弱的ASFV毒株，且对攻毒产生保护作用。从ASFV BA71毒株(基因I型)中敲除CD2v基因的情况也是如此。然而，在ASFV基因Ⅷ型毒株上，同样的敲除并没有产生同等程度的毒力减弱。另一个常见的靶基因是B119L(9GL)。几种主要的毒株显示出毒力衰减和保护作用，但ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚(Georgia)分离株存在问题。对于ASFV格鲁吉亚分离株，通过额外敲除DP96R(UK)基因 实现了毒力完全减毒。然而，一个重要的教训是，ASFV的遗传背景会影响基因缺失突变体的表型。

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