猪精不同冻融方法效果对比

随着养猪业的不断发展，人工授精技术在养猪业中不断推广和应用，很大程度上提升了生产效率和公猪利用率，增加了养殖效益。猪精液冷冻保存技术可以解决猪精不能长期保存的困扰，目前公猪精液冷冻技术国内外均有研究，虽然均取得了一定突破，但操作难度大、且在受胎率、产仔数方面都低于鲜精，这也是制约冻精推广的主要因素。

目前猪精冷冻方式主要分为程序冷冻和熏蒸冷冻两种，本研究通过比较两种冷冻方式对猪精的冷冻效果，以期待在保证冷冻效果的前提下利用程序冷冻仪代替传统熏蒸冷冻，来进行大规模公猪冻精批量化生产；当前猪冻精规格多数采用0.5mL/支，虽然小规格有利于冻精生产和复苏，但在猪场实际应用较为不方便，尤其是单支解冻不利于猪场实际配种操作，目前尚未见到批量解冻冻精的报道，所以本文批量解冻实验希望能够提高冻精实际应用效率，以便更有利于冻精的推广应用。

1 材料与方法

试验选用沈阳秀博种猪繁育科技有限公司成年纯种公猪24头，体质健壮，性欲旺盛。原精要求：精子活力≥90%，精子密度≥2亿/mL，精子畸形率≤10%。

配制冷冻保护液。

首先在1000mL的烧杯中准确倒入770mL超纯水，在磁力搅拌器上搅拌并加热至34℃，此时缓缓倒入基础稀释粉，充分搅拌溶解，待溶液pH稳定后加200mL新鲜卵黄并充分搅拌溶解，取出500mL作为冷却液；向剩余溶液中添加30mL甘油和5g乳化剂Equex-Paste，充分搅拌溶解后作为冷冻液。

本实验主要采用熏蒸冷冻和程序冷冻来进行冻精实验。

熏蒸冷冻条件为液氮面距离冻精细管横截面中心3cm，密闭熏蒸8min；程序冷冻采用表1的冷冻曲线进行操作。检测合格的原精使用常温保存稀释液进行1～2倍等温稀释，梯度降温至17℃，在此温度下900g离心20min，抽弃上清液后添加冷却液，充分悬浮后放置5℃平衡柜中平衡3h，待精液温度降至5℃后添加冷冻液，调整精液浓度为8亿/mL，充分悬浮后进行灌装，之后分别进行熏蒸冷冻和程序冷冻。

本实验采用50℃水浴16s进行解冻，批量解冻实验共分为9个实验组，使用自制的批量解冻器依次解冻9个实验组冻精，每次解冻后需擦干批量解冻器，方可进行下一批次解冻，不可留有水滴，若有水滴会影响解冻效果。解冻后使用精液分析仪（IVOS-II）检测精子活力和前向精子。

数据先使用Excel处理，再使用SAS9.2软件进行单因素方差检验，结果以“平均值±标准差“表示，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

不同冷冻方法对冻精活力和前向精子的影响，详见表2。

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