河南省某地方品种鸡场禽白血病净化效果探讨

摘要：基于河南省某地方品种鸡场禽白血病病毒 (Avian LeukosisVirus，ALV)感染状态调查结果，选择其核心鸡群开展净化初步研究。经过 2 个世代的净化，ALV-p27 抗原阳性率由 20.06%下降到 4.73%；ALV-A/B 抗体阳性率由 27.17%降低到 5.43%；ALV-J 抗体阳性率由17.39%降低到 6.52%；ALV 分离阳性率由 13.04%降低到 2.17%。以上结果表明该净化方案初步取得成效，可为其他地方品种鸡开展禽白血病（AL）净化工作提供参考。

禽白血病（AL）是由禽白血病病毒（ALV）引起的通过种蛋垂直传播的肿瘤性疾病，是目前危害我国养禽业发展的重要疫病之一 。该病已在全球许多国家发生和流行，早期 ALV-A、ALV-B 是引起鸡群淋巴性白血病和各类型肿瘤的主要亚群，自 1999 年杜岩等首次在我国肉鸡中检出 ALV-J 后，相继在蛋鸡和地方品系鸡中发现 ALV-J 的流行 。本课题组利用 2 年时间对河南省地方品种鸡 ALV 的感染情况进行调查，结果发现 ALV-J 和 ALV-ALB 同时感染非常普遍，且临床肿瘤类型和病理变化呈多样化，ALV 与网状内皮增生症病毒( REV )的共感染现象也较多见 。

AL 目前尚无疫苗可供使用，其预防控制主要依赖种群的净化措施。目前国际上普遍被采用的 AL 净化金标准为：核心群分别在 68、168 日龄采取血浆，接种 DF- 1 细胞，9 天后检测 ALV-p27 抗原，淘汰阳性鸡；对保留核心群种鸡的下一代所有刚出壳的雏鸡，检测其胎粪中的 ALV-p27 抗原，淘汰阳性鸡的所有家系成员，如此反复 4～5 个世代，直至达到净化。但我国大多数地方品种鸡场的规模和经济实力不够大，无力承受该净化程序的成本和代价。另外采用国际金标准净化要求的技术条件、人力成本、试剂成本及实验室仪器条件等都比较高。本研究以河南省某地方品种鸡为研究对象，先采取 ELISA 方法检测 ALV-p27 抗原，连续多代淘汰阳性鸡，将种群阳性率降低到一定水平以下，然后再接种 DF-1细胞进行病毒分离，以达到进一步净化的目的。

1、材料与方法

1.1 试验动物

来源于河南省某地方品种鸡场。

1.2 主要检测仪器和试剂

二氧化碳培养箱（Thermo 公司）、倒置显微镜、生物安全柜、酶标仪（Thermo 公司）、微量加样器、ALV- p27 抗原检测试剂盒（为 BioChek 公司产品）、ALV-A/B 和ALV-J 抗体检测试剂盒（为 IDEXX 公司产品）、DMEM 培养液（为 GIBCO 公司产品）、新生牛血清（为 GIBCO 公司产品）、胰酶、DF-1 细胞等。

1.3 检测方法

1.3.1 泄殖腔棉拭子 ALV-p27 抗原检测

采样前在样品管中加入 1mL 样品稀释液，用无菌棉签采集试验鸡泄殖腔棉拭子，与稀释液混匀后冷冻。反复冻融 2 次，检测前将样品恢复至 25℃，按照 BioChek 公司 ELISA 试剂盒的操作说明进行检测。

1.3.2 血清 ALV 特异性抗体的检测

采集试验鸡促凝血，4 000r/min 离心 10min分离血清，用稀释液将血清作 1:500 稀释，按照IDEXX 公司 ELISA 试剂盒的操作说明检测ALV-J 亚型及 ALV-A/B 亚型抗体。

1.3.3 病毒的分离

无菌操作采集试验鸡抗凝血，接种于已长成单层的 DF-1 细胞，37℃ 继续孵育 2h，弃上清液，更换为含有 1% 新生牛血清的 DMEM 培养液，在 37℃、5%CO 2 条件下继续培养 9 天。然后冷冻，反复冻融 2 次后，取细胞培养液用ELISA 试剂盒检测 ALV-p27 抗原。

1.4 净化程序和管理

1.4.1 核心鸡群禽白血病感染情况调查

为了解鸡群 ALV 的感染程度和感染类型，采集配套母系及父系核心群 163～170 日龄种鸡，每只鸡都戴好脚号，对号采集泄殖腔棉拭子，按照 BioChek 公司 ELISA 试剂盒的操作说明检测 ALV-p27 抗原并做好详细记录。抽样采集对应的血清和全血样品，血清按 IDEXX 公司ELISA 检测试剂盒的操作说明检测 ALV-J 和ALV-A/B 抗体，以确定鸡群白血病感染类型。全血样品进行 ALV 分离。

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