动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——苏丹红

由于苏丹红分子结构中含有偶氮基团，在水相流动相中加入甲酸防止色谱峰拖尾并提高电离效率，通过采用不同的添加比例，最后选定乙腈-水（含0.2%甲酸）溶液作为流动相体系。苏丹红Ⅰ~Ⅳ在该流动相体系下，经UPLC分离、MRM模式检测，出峰时间在3min之内完成，其保留时间依次为0.86min、1.31min、1.68min、2.85min，其中0.8min和1.05min出现的小峰分别为Ⅲ、Ⅳ的同分异构体，图7-29是4种物质混合标准品MRM色谱图。样品使用乙腈萃取、浓缩、定容、过滤后测试，4种物质在1~50ng/mL内线性关系良好，回收率为50.2%~101.3%，RSD＜17.5%。

6.4 GC及GC-MS

苏丹红染料沸点高，难以汽化，一般认为不能用GC法测定，并且食品基质的化学成分复杂，化合物极性较大，而极性柱不耐高温，故有关苏丹红的GC-MS的报道不多。

吴惠琴等将样品中的苏丹红Ⅰ用乙腈提取后，用GC-MS/SIM，选择m/z 77、115、143、248离子用于SIM检测，根据所选的4个离子的流出色谱峰面积比进行目标物确证，选择分子离子峰定量，取得了很好的效果。苏丹红Ⅰ的线性范围为0.01~10mg/L，相对标准偏差小于6.1%，回收率为85%~90%，检出限为1μg/kg。与欧盟标准方法相比，该法灵敏度高10~100倍，分析时间缩短，且采用保留时间与质谱同时定性，消除了食品中复杂基质的干扰，提高了可靠性，适用范围扩展到所有食品及原料的分析。

黄晓兰等研究利用耐高温、低流失的弱极性高效毛细管柱，采用GC-MS-SIM建立了准确可靠、灵敏度高、快速简便的同时测定食品中苏丹红Ⅰ~Ⅳ的新方法，线性范围分别为0.01~10mg/L（Ⅰ、Ⅱ）和0.1~10mg/L（Ⅲ、Ⅳ），检出限为1μg/kg（Ⅰ、Ⅱ）、5μg/kg和10μg/kg，回收率为86%~95%，该法与欧盟标准方法相比灵敏度高1~2个数量级，分析时间缩短，用色谱保留时间、质谱同时定性，消除了食品中杂质的干扰，结果准确可靠，选择性和重复性好，适用于所有食品成品及原料的检验。

苏小川等采用GC-MS/SIM测定了食品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ，试验选用了毒性较低、价格相对便宜的正己烷作为提取剂，对加标样品采用直接萃取和氧化铝柱净化两种处理方法。结果显示，前者回收率为85.5%~95.4%，后者为80.0%~88.1%。

李东刚等建立了用离子阱GC-MS-MS法定性定量检测食品中苏丹红Ⅰ染料的方法。结果表明，苏丹红Ⅰ在0.045~0.90mg/L浓度范围内呈线性关系，检测限为4.5μg/kg，回收率为83.1%~103.2%。

刘永波等也研究了苏丹红Ⅰ的GC-MS，试验中采用超声波提取样品，采用SIM方式，根据保留时间和特征离子丰度进行确证，在13min内可快速检测苏丹红Ⅰ残留。该法消除了基质干扰带来的假阳性，与LC相比，时间短、精密度和准确度高，易确证，适用于食品中苏丹红Ⅰ残留的检测。

6.5 ELISA

ELISA是建立在抗原与抗体高度特异性结合及抗原或抗体的酶标记基础上，对样品纯度要求不高，适于大批量样品的检测，但容易产生假阳性，且费用较高。

Chunmei等利用羧基化苏丹红偶联BSA为免疫抗原，免疫小鼠并获得了对苏丹红Ⅰ和Ⅲ高特异性的单克隆抗体。在磷酸盐缓冲液和辣椒酱中的检测限分别为0.01ng/mL和0.5ng/g，回收率为84%~99%，变异系数为14.9%~33.3%。Xu等通过化学方法合成苏丹红Ⅰ免疫抗原、包被抗原并制备了多克隆抗体。竞争性ELISA表明其IC50为1.6ng/mL，检测限为0.03ng/mL，检测线性范围为0.1~14ng/mL，与对位红和其他结构类似物的交叉反应率为13%。韩丹等建立了测定番茄酱和辣椒面中苏丹红Ⅰ含量的间接竞争ELISA法。首先对苏丹红Ⅰ分子做修饰，再与载体蛋白交联制得免疫抗原和包被抗原，经动物免疫制得抗苏丹红Ⅰ的抗体；然后建立间接竞争ELISA检测样品中的苏丹红Ⅰ，样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释即可进行ELISA测定，方法检出限为0.12μg/L，回收率为106%~110%。

ELISA对于样品中苏丹红的快速筛选具有一定的优势，但也不可避免地存在着一些缺陷，如对试剂选择性高，对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应等，不能同时分析几种苏丹红染料，从而限制了其在生产实际中的应用。

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