动物源性食品中有害化学物质及污染物的检测——苏丹红

5.2 净化

目前，用于苏丹红提取液的净化方法有固相萃取、凝胶渗透色谱、基质固相分散、分子印迹聚合物、免疫亲和色谱法等。

5.2.1 固相萃取

固相萃取（SPE）是目前在苏丹红分析中常用的一种净化手段，SPE处理过程中不使用大量互不相溶的溶剂，不产生乳化现象，提高了方法的回收率，重现性好。目前，中性氧化铝层析柱是常用的SPE小柱，其原理是基于中性氧化铝对苏丹红染料有很特异的吸附解析特点以及苏丹红的极性与天然色素、油脂的极性差异。

利用中性氧化铝层析柱过滤可除去样品中的大部分杂质，在保证好氧化铝活度时，苏丹红系列染料吸附解析率可达到100%，因此纯化后的样品在分析条件下无任何杂峰干扰，且能缩短HPLC对样品的分析时间。目前苏丹红检测的国家标准就采用了氧化铝柱层析法来净化提取液，有利于去除干扰，提高定性准确度，保护分析柱，增加柱寿命，检出限数值比欧盟标准低了2个数量级（10μg/kg），并且此方法获得了很高的准确度和回收率。但国家标准中的样品处理方法只适用于辣椒粉等粉状样品，此方法在处理其他样品如肉类、含水量较大样品、油状样品时并不十分理想，当处理方法进行到过氧化铝层析柱时，在固体氧化铝顶端会出现水层及油层，从而使过滤无法正常进行。关尔渤等对肉制品或油状样品中苏丹红Ⅰ的处理方法进行了改良，称样后加入60mL正己烷充分匀浆10min，超声30min，滤出上清液，再以20mL正己烷匀浆、过滤2次。合并3次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，然后过氧化铝层析柱，解决了国家标准方法中无法正常过柱的问题。

由于氧化铝层析柱活性过高或过低都会影响方法回收率，而不同厂家和不同批次的氧化铝的活度差异较大，因而用氧化铝层析柱纯化苏丹红样品前，不仅需对不同批次的氧化铝层析柱进行评估和调整，而且需对氧化铝进行干燥处理，在确保净化效果的情况下尽量减少待测物的损失，提高方法的回收率。关尔渤等将氧化铝经105℃干燥2h以上，并于干燥器中冷至室温，按比例每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用，通过加样回收率试验，取得了令人满意的结果。

此外，李吉平等用FlorisilSPE柱对样品进行净化的方法也获得了较高的样品回收率。

5.2.2 凝胶渗透色谱

凝胶渗透色谱（GPC）是基于尺寸排阻的分离原理，利用样品中各组分分子大小不同，从而在凝胶中滞留时间不同而达到分离的目的。用GPC对样品进行净化分离时，油脂等大分子物质首先流出，随后是小分子物质，而且淋洗溶剂的极性对分离的影响并不起决定作用，特别适合净化含脂和色素的样品。尤其是基质比较复杂时，GPC更有优势，其色谱柱可以连续使用几个月而不影响柱效。另外，GPC还具有自动化程度高以及较好回收率等优点。GPC凝胶有不同孔径，目前多采用XAD系列凝胶，以不同配比的环己烷和乙酸乙酯作为洗脱剂。在苏丹红含量测定中，利用GPC能有效地去除样品中的大分子油脂和天然色素，尤其适用于净化含类脂的复杂样品。

吴宁鹏等建立了一种简单、实用的鸡蛋中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ残留的GPC-UPLC检测方法。结果表明，采用GPC进行净化，样品洁净无杂质峰，净化效果好。在空白鸡蛋中添加50~1 000μg/kg浓度下，4种苏丹红的平均回收率为65%~85%，批内变异系数为1.0%~4.8%，批间变异系数为2.1%~5.9%。梁高道等用正己烷萃取，用GPC处理样品，去除样品中的大分子油脂和大分子天然色素，最后用HPLC-紫外法检测食品样品中的苏丹红。谢维平等建立了凝胶柱净化-HPLC同时检测食品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的方法。样品用乙醇提取，提取液经凝胶柱净化，用环己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）洗脱。结果表明经净化的样品即使目标组分浓度很低，仍能得到较好信噪比的HPLC图，而未经净化的则难以从干扰峰中辨别出苏丹红。该方法的检测限为7~14μg/kg，平均加标回收率为80.7%~96.3%，相对标准偏差为2.4%~5.9%。

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