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动物源性食品中霉菌毒素的检测——杂色曲霉素

日期:08-13 作者:曲志娜 赵思俊等- 小 + 大

  6.2 ELISA
  用包被抗原包被酶标板,明胶封闭,加入待检样品和抗ST单克隆抗体竞争反应,加酶标记羊抗鼠IgG,加邻苯二胺底物液显色,加2mol/L硫酸终止反应,用酶标仪检测。然后绘制标准曲线,求出回归方程和相关系数,从而求出样品中ST含量。
  田禾菁等用ELISA检测ST,得出标准曲线的线性范围为0.01~1.0ng/mL,检出限为0.01ng/mL。在样品中加入1~100μg/kg不同浓度的ST,测得加标回收率为85%~115%。
  6.3 高效液相色谱法(HPLC)
  用HPLC检测时,使用Micro Bondapak C18柱,流动相为四氢呋喃-甲醇-水(5:1:4,V/V),流速为1.0mL/min,荧光检测时激发波长(λex)365nm,发射波长(λex)435nm,狭缝宽度为10nm。
  用HPLC检测时标准溶液的配制:准确称取0.68mgST标准品,用2mL乙腈溶解,再用甲醇定容至25mL容量瓶中,摇匀后备用。取1mL高浓度标准溶液(27.19μg/mL),用甲醇-水溶液(70:30,V/V)定容至25mL容量瓶中,配成低浓度(1.09μg/L)的溶液,在上述色谱条件下,ST的保留时间为3.974min。
  黄化成等用HPLC在加标量为2.0μg/kg时测得花生粕中ST的平均回收率为89.6%,在加标量为5.0μg/kg时测得混合饲料中ST的回收率为94.3%。
  袁建等建立了检测小麦中ST含量的HPLC。在样品中的ST经正己烷提取后,采用国产硅镁型吸附剂制备层析柱净化后,运用HPLC测定,色谱柱为Nova-Pak C18柱,以甲醇-水(70:30,V/V)为流动相,流速0.7mL/min,检测波长为246nm。结果:该方法平均加标回收率为79.26%,RSD为3.84%,最低检出量为0.017μg/kg。
  6.4 液相色谱-质谱联用(LC-MS)
  将Waters Alliance2695液相系统连接到三重四极杆液质联用仪上,在分析ST时电喷雾探头采用正离子模式。流动相为含0.01%甲酸的乙腈和0.01%的甲酸水(75:25,V/V),采用C18色谱柱,流速为0.3mL/min,柱温为30℃。注射器为50μL,用ST标准品对质谱仪的参数进行优化。
  Versilovskis等用LC-MS在小麦中进行ST的添加回收试验,并对污染ST的小麦、芥麦、大麦等谷物样品进行试验。由于基质效应的影响,因此在空白小麦样品中添加ST并绘制标准曲线,结果表明线性关系良好,小麦样品中的检测限为0.5μg/kg,样品回收率在97%以上,并且重复性良好。添加回收试验数据见表4-5。
  Scudamore等用LC-MS对玉米、面包等进行ST的检测,得到玉米中的检测限为1.7μg/kg面包中为1.9μg/kg。

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