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动物源性食品中霉菌毒素的检测——黄曲霉毒素
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另外，ELISA检测AFB1的技术在肝癌病因与预防中也有较广泛的应用。迄今为止，人类食物中AF的普遍污染是人肝癌发生的可能因素的观点已得到了广泛承认。目前认为测定AF白蛋白（AF-Alb）化合物可以作为摄入AF的体内指标，并经全球众多的研究证实AF-Alb是一个用于估计AF暴露水平很好的标记。AF暴露的生物标记是基于对人类中这些化合物的了解而建立起来的。生物标记水平的改变可用来评价干预的有效性。Kensler、Wang等在多个地区进行了多项关于肝癌化学预防的试验，都借助了免疫吸附柱纯化等AF检测技术，并应用于受试者尿样或血样的分析，以评价预防干预的效果。 免疫亲和色谱（IAC）是美国分析化学家协会（AOAC）检测AF的标准方法。其原理是以单克隆免疫亲和色谱柱为分离手段，将单克隆抗体与载体蛋白成功偶联，偶联物填柱形成IAC柱，并与AF半抗原产生对应的特异性吸附关系。当样品通过柱子时，因抗原只能吸附相应的抗体，所以IAC也就只能吸附AF，别的杂质因不被吸附而流出柱子。IAC的优点是在检测过程中，检测人员不用直接接触AF，并接触很少试剂就完成整个检测，操作简单、耗时短、灵敏度高且能直接读数，所以应用范围很广。局限性是不能单独测AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，只能测AF总量，同时对试剂要求也较高，如检测过程中所有用到的水必须是双蒸水，而所用的容器也必须用双蒸水洗涤。 胶体金免疫层析法（GICA）利用纳米金作为标记物，在很短的时间内就能测出待测物的含量，并可以直接读取结果。该技术不需要分离纯化样品，也无须对检测溶剂做任何的处理，真正做到一步检测，方便、高效。Zhang等通过此方法分析样品，用时不到10min，非常高效。在金标免疫试纸法的应用过程中，孙秀兰等研究了样品基质对试纸条信号灵敏度的影响，并为消除这些影响提供了经验。在检测样品中，对粗提取液用氯仿法萃取后，使其挥干再溶解，可将盐离子和重金属离子对测定的影响控制在允许范围之内；用石油醚脱脂，可将油脂对测定结果的影响降到最低。邓省亮等用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗AFB1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上，AFB1偶联抗原和二抗分别结合于NC膜上，依次将样品垫、胶金垫、NC膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明，AFB1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/mL，检测时间为10min，批内和批间重复性为100%，假阳性率和假阴性率均为0。 时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）是超微量检测中一项新兴的检测技术，灵敏度可达10－19，较放射免疫法（RIA）高出3个数量级。原理与ELISA一致，不同的是TRFIA采用了一种特殊的标记物，即三价稀土离子（铕离子、铽离子等）代替酶标记物或其他荧光物，用时间分辨荧光仪测定产物中荧光强度，从而判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。TRFIA利用了稀土元素荧光波长与其激发波长的巨大差异，克服了普通紫外-可见分光光度分析法中杂色光的影响，可以大幅度提高分析的灵敏度。黄飚等采用自制AFB1全抗原和多克隆抗体，构建了一套较为完整的AFB1-TRFIA检测平台，具有较好的分析稳定性，灵敏度达到0.0039μg/L，线性范围0.0039～100μg/L，在灵敏度和测量范围方面均超越了市场上常用的进口或国产酶联免疫检测试剂（分别为0.1g/L和0.1～10μg/L），并经过多方面考核，各项指标符合标记免疫试剂的要求，对食品、饲料等样品检测效果均佳，具有很好的应用前景。 |