动物源性食品中寄生虫的检测——旋毛虫
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使用一台有恒温控制装置的组织搅拌器可将消化时间缩短到12～15min，使用3500T型实验室搅拌器的其他处理混合样品的方法已做过报道。欧洲经济共同体（84/319EEC）也推荐使用磁力搅拌器处理样品。 5.2 免疫学方法 5.2.1 血清学检测 血清学检测在抗体检测上取得良好效果，用于检验寄生虫特异性抗体的ELISA为动物屠宰前后的血清血液检验提供了一种快速的方法。它能检测到100g组织中只有一个包囊蚴的低水平感染。感染猪和马已研制成功几种高度特异性的抗原制品。它们对猪旋毛虫病的诊断具有高度的特异性。经屠宰检查对照，ELISA假阳性率＜0.3％，但对每克组织感染1个以上蚴虫的猪敏感。由于旋毛虫所有型虫种都含有旋毛虫分泌性抗原（ES），所以在ELISA中采用分泌性抗原来检测旋毛虫的存在。其他非ELISA的血清学方法（如间接免疫荧光试验）缺乏特异性，不适用于检测旋毛虫感染。 猪旋毛虫病血清学诊断的缺点是，人、畜感染旋毛虫后，抗体持久存在于血清中，不利于疗效考核。感染猪群出现小部分的假阴性结果。这样的结果是轻度、中等程度感染的猪体内的抗体应答的动力学起动慢的缘故。这种慢速度的抗体形成意味着感染后几周内不能做出诊断。感染后猪的血清学反应至少持续6个月不下降。马的抗体水平仅能维持几个月。这与幼虫在肌肉中的下降相一致。所以马的血清学检查方法价值有限。对于野生捕猎动物中的抗体反应所知有限。血清学试验与消化试验比较，其优点是在检查轻度感染旋毛虫的动物时敏感性提高；这种敏感性对检查农场是否存在持续感染非常有用。而取样为1g的消化试验，只能检查比每克中有3个幼虫更严重的后果，有些动物尽管感染更严重，但在感染后21～35d血清仍可呈阳性。因此血清学检测在监测计划中是很有价值的，在屠宰检查时可替代消化试验。由于旋毛虫感染通常少见，随机取样并不可靠，应当进行群体检验，这就需要制定整体监测方案。 其中，近年国内外已成功地制备出旋毛虫幼虫单克隆抗体。采用虫体可溶性抗原（有感染性幼虫体可溶性粗抗原和自感染性幼虫体杆细胞内α颗粒提取的可溶性抗原两种）、表面抗原（自虫体表面提取或剥离的可溶性抗原）及排泄分泌性抗原（或称代谢抗原排泄分泌性抗原）结合单克隆抗体、多克隆抗体-间接双抗体夹心ELISA法检测患者血清中循环抗原，抗原阳性结果提示为现症感染，且具疗效考核价值。 国内外试用过多种免疫学方法，包括皮内试验、补体结合试验、皂土絮状试验、对流免疫电泳、环蚴沉淀试验、间接荧光抗体试验（IFAT）、间接红细胞凝集试验（IHAT）以及酶联免疫吸附试验（ELISA）等。其中后四者的特异性强、敏感性高，且可用于早期诊断。 5.2.1.1 IFAT IFAT较早用于诊断旋毛虫病，初期用全虫做抗原，后来发展为用虫体或带虫肌肉切片做抗原。以全幼虫做抗原，在幼虫皮层周围或幼虫口部有荧光沉淀物者为阳性反应。患者于感染后2～7周可出现阳性反应。应用旋毛虫幼虫冰冻切片做抗原，以IFAT检测旋毛虫病人血清，抗体阳性率为90.74％，发病后第1周抗体阳性率70.59％，第2周升至91.30％，有显著差异（P＜0.025），至第3、4周分别达95.83％和100％。旋毛虫幼虫抗原片在－20℃至少可保存25年而不失活。对旋毛虫早期和轻度感染均有诊断价值。 5.2.1.2 IHAT IHAT用冻干致敏绵羊红细胞，以IHAT检测患旋毛虫病人血清中抗体。用滤纸干血滴代替血清，结果无显著差异，用IHAT方法检测感染旋毛虫豚鼠血清，阳性率为100％。结果表明操作简便的IHAT具有较高的敏感性和特异性，适用于流行病学调查。 5.2.1.3 ELISA ELISA敏感性高于IFAT。常以虫体生理盐水浸出液为抗原。ELISA由于具有经济、检测方法标准化、特异性和敏感性比较稳定以及检测结果可信度高等优点，已经成为人及动物旋毛虫病最常用的检测方法，同时它也是OIE唯一推荐使用的、用于家猪旋毛虫感染的血清学检测方法。 用ELISA诊断旋毛虫病时，使用的抗原为旋毛虫的分泌性抗原。这种分泌性抗原是由分子量为45～55ku的糖蛋白组成的。 |