PCR反应条件:95℃预变性5min;95℃变性45s,53℃退火50s,72℃延伸45s,30个循环;72℃后延伸8min。4℃保存。 (4)电泳 用电泳缓冲液(1×TAE)制备1.8%~2.0%的琼脂糖凝胶,取5μLPCR扩增产物,分别和2μL上样缓冲液混合进行点样,用DNA分子量标记物做参照,3~5V/cm恒压电泳,电泳20~40min,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。 (5)结果判定在阴性对照未出现条带、阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未同时出现511bp和789bp大小的两条扩增带,则判为阴性;如待测样品同时出现511bp和789bp大小的两条扩增带,则判为阳性。 如果阴性对照和(或)阳性对照未出现预期大小的扩增条带,则本次检测结果无效,应重新试验。 |