产品监测

动物源性食品中细菌的检测——沙门氏菌

日期:07-11 作者:曲志娜,赵思俊等- 小 + 大

5.1 常规的标准检验方法

用于检测沙门氏菌的传统标准检测方法是将食物样品分步增菌,以增加病原菌的检出率。这种培养方法总体可分为三个不同阶段,即预增菌、选择性增菌及分离步骤。传统沙门氏菌检测法全过程至少需4d才能得出明确的诊断结果。GB4789.4—2016是目前我国规定的对畜产品中沙门氏菌的标准检测方法,主要是根据沙门氏菌的生化特性,进行预增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定和血清分型。在检测畜产品过程中,应注意根据不同的样品采取不同的检测步骤。

5.1.1 细菌分离培养

(1)预增菌 称取25g(mL)样品放入盛有225mL缓冲蛋白胨水(BPW)的无菌均质杯中,以8000~10000r/min均质1~2min,或置于盛有225mL BPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定pH,用1mol/mL无菌氢氧化钠或盐酸调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于(36±1)℃培养8~18h。

如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min或2~5℃不超18h解冻。

(2)选择性增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mL四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液内,于(42±1)℃培养18~24h。同时,另取1mL,转种于10mL亚酸盐胱氨酸(SC)增菌液内,于(36±1)℃培养18~24h。

(3)分离培养 分别用接种环取增菌液1环,划线接种于亚硫酸铋(BS)琼脂平板和木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于(36±1)℃分别培养18~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40~48h(BS琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表2-2。

5.1.2 生化鉴定

(1)自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于(36±1)℃培养18~24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表2-3。

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