我国非洲猪瘟相关技术专利发展现状

  4 ASF技术专利研究核心

  从图5可见，在该领域中专利申请量排名第一的中国动物卫生与流行病学中心及其分中心在ASFV鉴别、诊断以及ASF疫苗研发方面都做了大量研究。早期中国动物卫生与流行病学中心及其分中心将重点集中在ASFV鉴别和诊断上。王志亮团队早在2012年就将关注点放在了ASF的诊断上，在涉及的CN102967703A中，将表达的结构蛋白P72、K205R、P54、A104R免疫动物后分离获得ASFV抗原多因子血清并将其用于ELISA诊断。该团队通过获得血清而建立的ELISA检测方式有利于解决当时我国无法生产ASF诊断试剂盒的瓶颈，并且该检测方式有助于ASF的诊断、监测。而吴晓东团队则是聚焦于核酸层面的检测，提供了一种ASFV P72基因的焦磷酸测序技术，通过设计ASFV特异性引物及焦磷酸测序引物，进行PCR和电泳扩增检测特异性引物扩增片段长度，然后进行焦磷酸测序反应并根据PCR扩增及焦磷酸测序结果判定样品中是否存在ASFV。到2019年，中国动物卫生与流行病学中心及其分中心的专利申请量激增，同时在ASF鉴别和诊断方面的技术也在不断更新。针对ASFV强弱毒的鉴别，CN110878377A中公开了以ASFV的P72、MGF和CD2V基因序列为基础，设计引物与探针并建立的检测技术。为了达到快速精准鉴别ASF的目的，CN110129485A提供了联合等温扩增技术、CRISPR-Cas12a酶以及特异性切割ASFV P72基因序列的向导RNA切割体系，通过荧光信号即可观察的检测系统。为进一步提高检测的快速性和特异性，CN110453012A、CN110438265A公开了基于重组酶介导的等温扩增法检测多种基因型ASFV的检测技术。而CN110735006A则提供了ASFV的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，其不仅特异性高并且样品抽提以及检测最快能在2 h完成。除此之外，中国动物卫生与流行病学中心及其分中心在疫苗制备方面也有了突破，童光志团队针对ASF以及猪繁殖与呼吸综合征实现“一针防两病”的目的，制备了表达ASFV蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒并研发了全新的ASFV疫苗，以此为思路，其先后研发了表达ASFV p30、p12、p17、p54蛋白与重组猪繁殖与呼吸综合征病毒。同时，在CN110551695A以及CN110093324A中，也基于病毒疫苗的疫病防治思路，分别获得了ASFV SY18分离株的四基因缺失弱毒株以及获得了中国流行株Pig/CN/HLJ/2018的MGF360-505R缺失和CD2V与MGF360-505R联合缺失的基因缺失病毒并将其用于ASF疫苗的制备。除了病毒疫苗以外，步志高团队还关注了ASFV的T细胞抗原多肽，筛选出了ASFV p30、p54、p72以及CD2v重要结构蛋白的细胞免疫抗原优势表位，为ASFV多肽载体疫苗的研发提供了保障。

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