预防兽医
口蹄疫灭活疫苗研究进展
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2.4 乳化和配苗 为提高FMD灭活疫苗的免疫效果，需要将灭活的抗原收获物与佐剂混合以增强免疫应答。主要有3种佐剂用于FMD疫苗，分别是氢氧化铝胶(Al(OH)3-gel)、皂苷和不同类型的油乳胶。前两种类型的佐剂一般被称为液体疫苗。 最普遍的牛用疫苗是氢氧化铝胶吸附病毒抗原制备的，其中氢氧化铝胶为佐剂，其他成分还有消泡剂、酚红(如果疫苗使用者需要)、水解乳蛋白、蛋白胨磷酸培养基、抗菌素、氨基酸、维生素和盐，另外还加皂素作为另一种佐剂以及硫柳汞/氯仿等防腐剂。氢氧化铝胶和皂素佐剂用于常规疫苗，早已证实了对牛的免疫效力，但对猪的免疫效力低的多。 另一种剂型的疫苗是以矿物油为佐剂的油苗，油佐剂疫苗优于传统的氢氧化铝胶皂素疫苗，不仅可以用于猪的免疫预防，而且免疫持续期也比较长，所以在南美和中国也广泛用于免疫牛的疫苗配制。一般预先将乳化剂(如单油酸甘露糖醇)和矿物油混合，再加入等体积水相抗原，经胶体磨或连续机械性或流动性超声乳化机乳化而成。如果再加入含有少量吐温-80的水相抗原进行乳化，就能降低疫苗的黏稠度[11]，制成较复杂的双相乳剂疫苗(水/油/水)。目前认为双相油佐剂疫苗效果最好，能够用于所有的动物。而Montanide ISA206和ISA205的利用大大简化了疫苗的配制[12]。 近年来，“即用型”油佐剂的研究取得了很大的进展，例如，含十八烯酸酯和2,5-甘露糖醇酐的油可以乳化成既稳定黏度又小的双相乳剂，而且不需要超声乳化设备[13]。 2.5 灭活疫苗的质量控制 由于灭活疫苗在防控FMD上的成效，许多国家把很多研究力量投入到新的和改进的灭活苗生产工艺上，对影响疫苗质量的因素及其控制进行了广泛深入的研究[14]。 2.5.1 生产控制 FMDV抗原和疫苗的生产必须完全遵守GMP标准，在严格无菌条件下进行。细胞培养、病毒增殖的最适温度应准确控制在37 ℃±1 ℃，灭活病毒的温度控制在30 ℃±1 ℃，其他生产阶段应将温度降到4 ℃～6 ℃。病毒增殖培养的pH应维持在7.6左右，绝不能低于7.0[15]。 FMDV很容易发生抗原漂移，为确保疫苗质量，应加强种毒管理。无论生产用毒种还是效检用毒种，都要建立完善的种子批制度。定期对母种、基础种子、工作种子进行理化特性、型特异性、免疫原性和毒力检测，并进行无菌检验、支原体检验、外源病毒检验。所有毒种均应用加50%甘油的PBS于－20 ℃以下保存。 2.5.2 中间检验 生产FMD疫苗所涉及的所有原材料，如血清、各种试剂等，都必须按照其相应的质量标准进行严格检测。 由于FMDV抗原的数量和质量直接影响疫苗效力，应通过灭活前病毒滴度或灭活后146 S颗粒含量测定，对生产的病毒液质量进行准确评估。 灭活完成后，每批灭活病毒抗原样品应通过敏感单层细胞传代或乳鼠接种试验，判定灭活病毒抗原的安全性。敏感单层细胞传代时，通常连续传2代～3代，应无CPE；样品接种乳鼠后，连续观察7日，应全部健活。欧洲药典规定[16]，FMDV灭活安全检测时，每1 000 L灭活病毒抗原应取样6 mL 。 参考文献（略） |
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