预防兽医
口蹄疫灭活疫苗研究进展
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摘要：灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗，研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义，其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展，包括毒株筛选，病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的质量控制。制苗毒株的选择是研制疫苗的首要问题，直接关系到疫苗的免疫效果；病毒灭活和随后的安全试验是在制备灭活FMD疫苗中最关键的步骤；抗原浓缩纯化和配苗是保证疫苗良好免疫效果的必需。最后阐述了口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫防控中的作用。 关键词：口蹄疫；灭活疫苗；研制；质量控制；作用 口蹄疫(Foot-and-mouth disease， FMD) 是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus， FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病。口蹄疫病原是口蹄疫病毒，属微核糖核酸病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthavirus)，有A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3以及Asia 1型7个血清型，每个血清型又包含若干个亚型。该病毒不仅在各型间没有交叉免疫性，同血清型的各亚型之间也仅有部分交叉免疫性[1]。 各国家对FMD控制政策的选择依赖于自身的FMD状况及其传入的危险性。许多国家的FMD呈地方性流行或大流行趋势，此时采取扑灭政策是不现实的。采用疫苗接种来限制疫病的流行则更有效。从FMD疫苗的整个研究和应用情况看，活毒疫苗由于其自身固有的缺陷，已经被世界上许多国家摒弃；新型疫苗虽然取得一些非常有前途的结果，但在免疫效力和经济上目前难与常规疫苗竞争。常规灭活疫苗仍然是当前FMD免疫控制采用的主要疫苗。 1、FMD灭活疫苗的历史背景 1925年，Vallee等采集了FMDV感染牛的水疱液，经甲醛灭活，首次制成了FMD灭活疫苗。1926年－1929年，Belin及其同事首次用FMD发病牛舌皮组织病料制造FMD甲醛灭活苗。FMDV经甲醛灭活后，可以保持大部分免疫原性，但是，这些疫苗制造技术由于存在难以稳定生产、无法控制病毒扩散以及其安全性和免疫效力不确定等诸多弊端，在实践中应用时间不长。1934年Schmidt和Hansen发现了无毒性且能增强免疫效力的氢氧化铝胶佐剂。1938年Waldmann和Kobe结合上述两种方法，将FMDV接种于屠宰前健康牛舌皮内增殖病毒，待其发病后，取病牛舌部水疱皮和水疱液作为制苗病毒，加入氢氧化铝胶进行吸附，然后进一步用甲醛灭活，从而获得了符合实践要求的第一个FMD疫苗——铝胶甲醛灭活疫苗，当时将这种疫苗称为Waldmann疫苗或Schmidt-Waldmann疫苗[2]。1935年荷兰学者Frenkel用离体培养牛、羊、猪的胚胎皮肤，采用鸡血浆固定组织块的组织培养方法来培养FMDV获得成功。1947年－1954年，Frenkel又用牛舌上皮细胞培养法发展了自己创造的组织块Frenkel培养法，并用其增殖FMDV，使大规模病毒抗原生产技术获得成功。Frenkel疫苗在欧洲FMD的免疫防控上起到了重要作用。1952年Dulbecco首先用胰蛋白酶消化动物的肾脏皮质获得初代单层肾上皮细胞，用其培养FMDV获得成功。从1948年Sanford成功培育出第一个被称为L株(种系)细胞的传代细胞以来，各国兽医科学家相继用各种传代细胞系来培养FMDV，其中能获得满意滴度及病毒能稳定增殖的是PK-15细胞系、IB-RS-2细胞系和BHK-21细胞系。特别是自1962年BHK-2l细胞问世至今，它已成为制备FMD疫苗所需病毒抗原的理想细胞系，而广泛应用于FMD疫苗生产[3]。 2、FMD灭活疫苗研制 2.1 获取大量的病毒抗原 2.1.1 疫苗株筛选 在所有FMD灭活疫苗生产系统中，制苗毒株的选择是生产疫苗的首要问题。 曾经有一些观点认为，当地田间流行毒株应当用来制造有效的疫苗，但是由于许多流行毒株难以适应BHK-21细胞培养，不稳定或者适应后免疫原性会有所变化，即使适应细胞培养也需要一定的时间去试验和验证[4]，所以这种观点并不正确。选择的疫苗毒株必须要有良好的免疫原性及对田间流行毒株的抗原广谱性；其次要有良好的适应病毒培养系统及实验动物的复制能力和稳定性；另外，由于FMDV变异性强，为了保证有效的免疫效果，应定期检验疫苗毒株和流行毒株之间的抗原关系(r值)，并不定期地更新制苗毒株[5]。选定的制苗毒株需要通过连续传代适应单层细胞培养或悬浮细胞培养，但应尽可能减少传代次数，以防病毒发生抗原漂移。毒株经型、株鉴定，并确保无其他微生物污染后，加甘油－20 ℃保存或不加甘油于更低温度下保存。工作种毒从母源种毒进行数代扩增，使其感染性达到1 pfu/100细胞即可使用。 |
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