当前非洲猪瘟疫苗的研发现状及创新策略

ASFV在新生仔猪中会在八小时内产生病毒血症，从而引起猪先天免疫反应的急性瘫痪。对于先天免疫反应的这种快速逃避与ASF的急性临床表现有关。但是，对于致病的病毒相关因素仍然缺乏了解。寻找毒力相关的基因是产生基因修饰的ASFV毒株的关键步骤。 潜在的免疫蛋白和通用减毒标记尚未得到完全定义。 对于免疫逃逸机制的关键仍然尚未完全理解，需要在以后的研究中进行更多探索

3. 对ASFV免疫保护因子的不完全理解

毫无疑问，开发ASF疫苗的困难取决于多因素，包括对病毒-宿主相互作用的有限理解和病毒自身的复杂性。ASFV可编码80多种结构蛋白，它们在病毒吸附，侵入和复制过程中起关键作用。此外，ASFV分离株毒力的多样性使得确定免疫保护决定因素的任务变得更为复杂，该任务仍然是ASFV研究的主要空白。    

野猪可从ASFV的感染中存活证明疫苗研发完全可行，已经构建的基因缺失ASF疫苗为研发高效的ASF疫苗点燃了希望。此外，针对ASFV的保护性免疫反应的性质被认为是由“细胞”和“抗体”共同介导的。要开发针对复杂病毒的无病原体疫苗，对具有免疫原性蛋白质的详细了解是必需的。细胞内和细胞外的ASFV粒子中包含了不同的蛋白质，这可能会干扰对病毒的中和作用。但目前没有针对结构蛋白免疫原性的全面概述。

目前，为开发ASF亚单位疫苗已做出了巨大努力。但对ASFV保护性免疫反应和病原性免疫反应的有限了解阻碍了这些努力。发现赋予保护性抗体和T细胞介导的免疫力的抗原决定因素是对疫苗研发的有力帮助。蛋白质组学方法可用于确定感染过程中ASFV蛋白的表达谱。差异表达的蛋白质可用来自恢复期或免疫动物的血清进行免疫学筛选。感染诱导的记忆性B细胞和T细胞库也可以提供对免疫决定簇的了解。对ASFV细胞内蛋白质组学的最近研究发现了多种全新蛋白。Alejo等人的研究鉴定出44种新的病毒包装多肽，其中一半具有未知功能，在体内的表达谱也有待确定。如果得到进一步功能表征的支持，这些针对ASFV的蛋白质组学研究方法的，将有助于鉴定并研究ASFV的免疫决定因子。

4. ASF疫苗策略在不同的情况下的演变

在过去的几十年中，许多研究人员致力于开发ASF疫苗，并在ASFV免疫学的某些方面已取得重大进展。在此，我们对ASF疫苗研发的不同方案，结果和未来的可能性进行讨论。

4.1灭活的ASF疫苗仍然没有保护作用    

灭活疫苗是最常用的疫苗，已被广泛用于对多种传染病的防控。然而，在抵抗人类免疫缺陷病毒（HIV）或单纯疱疹病毒（HSV）引起的复杂病毒性疾病时，该类型的疫苗并不总是成功的。对猪的免疫戊二醛固定的ASFV感染的肺泡巨噬细胞和去污剂处理的抗原均未成功。最近已经再次确认使用PolygenTM或Emulsigen®-D佐剂的二元乙撑亚胺（BEI）灭活的ASFV未能诱导保护性免疫反应。鉴于灭活疫苗的内在本质无法诱导细胞免疫反应和上述讨论的实验结果，灭活ASFV作为疫苗本质上是不可行的策略。

4.2 ASF亚单位疫苗可提供部分保护作用

亚单位疫苗是最安全的基于抗原的特定疫苗，已经设计好了多种不同的ASF亚单位疫苗。多种ASFV蛋白，包括p54，p30，pp220，pp62，p72和CD2v等，参与病毒吸附和内化的各个步骤。这些蛋白质被认为具有免疫原性，可用于构建亚单位疫苗。为了评估免疫原性，Gómez-Puertas等证明杆状病毒表达的p54，p30和p72蛋白在免疫学上与中和抗体的诱导有关，因此可实现部分保护。例如，用杆状病毒表达的CD2v，p54和p30蛋白免疫的猪可产生中和抗体，在强毒力ASFV攻毒实验中存活。相似的，Barderas等证明用p54和p30嵌合蛋白免疫的猪可产生保护性体液免疫反应。但是，用杆状病毒表达的ASFV p22，p30，p54和p72蛋白免疫猪未能诱导充分的保护作用。 上述结果存在争议，这可能是由于存在干扰抗体或不同的实验设计。同样，人们一直对体液免疫反应的功能产生怀疑，这是由于免疫猪在攻击后会出现病毒血症。但无论如何，确实存在抗体介导的免疫，并通过将纯化的免疫球蛋白被动转移至仔猪而得以证实。

考虑到抗体介导的免疫反应的重要性以及CD8 + T细胞在保护中的关键作用，DNA疫苗已被尝试作为替代的ASF疫苗平台。事实上，DNA疫苗具有更好的免疫原性，因为抗原在细胞内表达并呈递需要通过MHC-1对CD8 + T细胞进行激活。 但是，用编码p54 / E183L和p30 / CP204L的DNA疫苗免疫的猪未能产生保护性免疫应答。为了改善这种DNA疫苗策略，用编码ASFV血凝素（HA）细胞外结构域（也称为CD2v）与p54 / E183L和p30抗原（也就是泛素CD2v / pEP402R-p54 / E183Lp30 /CP204L）融合的DNA疫苗免疫猪后，可引起强烈的体液和细胞免疫应答。此外，用编码多种ASFV ORF与泛素的融合蛋白的DNA表达文库对猪进行免疫，可对强毒攻击产生部分保护。据报道，这种部分保护与ASFV特异性T细胞的诱导相关，并揭示了细胞保护作用在ASFV感染中的作用。此外，这项研究还阐述了存在多种免疫原性和保护性ASFV抗原。

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