非洲猪瘟疫苗之路
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2018年8月初，我国首次报告非洲猪瘟疫情。我国是全球养猪和猪肉消费第1大国，养殖密度高，养殖总量大，生猪年存栏6亿头，占世界猪存栏总量的50%。但我国生猪养殖水平参差不齐，养殖场等相关产业生物安全存在诸多漏洞。因此，ASF传入我国后，迅速传播，迄今，已在31个省市区出现疫情报告，防控形势严峻复杂。由于 ASF 可给养猪业造成毁灭性打击，因此，非洲猪瘟疫苗研究从未间断。但由于 ASFV 结构复杂，病毒感染和免疫机制不清，尽管针对 ASF疫苗的研究起始于20世纪60年代末，近年来报道也很多，但尚未成功应用于实际生产中。 一 非洲猪瘟病毒之殇 非瘟病毒粒子结构类似于虹彩病毒科，基因结构和复制方式类似于痘病毒科。ASFv不仅有庞大而复杂的基因组，还有很多保护层。它能够躲避机体免疫系统监视与免疫反应，甚至能感染免疫细胞，更有超强的体外生存能力，致死率高达100%。因此，ASFv又被称为“动物界的艾滋病毒”。 非瘟疫苗研制的第一大困难，在于ASFv具有多种(20种)基因型和过于复杂的基因结构，人们对ASFv的研究和认识还远远不够。ASFv能编码150到200个蛋白，但其中有50%的蛋白功能人们还没有弄清楚。“ASFv基因组成结构非常复杂，普通的病毒DNA只有10～20kb(kb，DNA长度单位)，但ASFv的DNA有170～190kb。ASFv的DNA里面有腹膜细胞，使得耐受力很强，保护非常好，而且它的变异性又很高，(所以ASFv)并不是单一的病毒，而是一个非常复杂的病毒家族。”这是来自世界知名非洲猪瘟专家桑切斯.斯凯诺教授(西班牙国家暨世界动物卫生组织ASFv研究实验室主任)在研究了40年ASFv后得出的结论。 另非洲猪瘟因很少产生中和抗体，所以，无血清型概念，但可以通过红细胞吸附试验，分成8个血清群，不同的血清群之间交叉保护力比较差，百年老病没有疫苗与此相关。 1.免疫组织损伤： 非洲猪瘟病毒主要感染猪的单核吞噬细胞和淋巴细胞，引起细胞坏死，进而导致机体免疫功能低下或不全，产生不完全中和抗体，与艾滋病病毒相类似。脾脏的红髓、边缘区、周围动脉淋巴鞘和巨噬细胞鞘以及淋巴结的副皮质区、滤泡间区和毛细血管后静脉坏死破坏，这些部位都含有抗原传递细胞，其破坏程度取决于病毒的毒力，毒力愈强，造成的破坏愈严重。研究表明：超强毒感染猪幸存10天后血清中仍测不出病毒特异抗体，而中等毒力毒株感染猪在感染后的 3～4 天可测出特异 IgM（仅提示近期感染，利于早期诊断）， 6～ 7 天可测出特异IgG （主要的抗感染抗体）。 2.抗原蛋白太多且易突变 我国发现的非洲猪瘟有180kb的基因组，含有约150个开放阅读框，可编码150～200种蛋白质。目前确认的有24种基因型，其中，北非为Ⅰ型，东欧、高加索、俄罗斯、中国为Ⅱ型。本次中国非洲猪瘟疫情的毒株基因序列与格鲁吉亚2007株和俄罗斯伊尔库茨克2017株的相应序列完全一致。 （1）不清楚哪些蛋白与免疫保护相关 非洲猪瘟病毒编码的150多个蛋白质中，大致明确结构蛋白有50余个，其中，参与病毒复制的蛋白大约为30个，其他蛋白质的作用尚不明了。有人认为非洲猪瘟难以做出能产生有效中和抗体的疫苗，与该病毒基因组的高度变异性有关，其中，包括不同病毒分离株基因组长度的多样性，病毒克隆异质性以及病毒传代过程中的易变性。到目前为止 ,除针对相对分子量为 7.2×10 4的主要结构蛋白的单抗和针对相对分子量为 2.7×104的抗血清，具有一定程度的非典型中和作用外，尚未发现其他更为理想的保护性抗原。 （2）抗原竞争： 维努埃拉认为处于强势的非中和性抗原抑制处于弱势的中和性抗原，这种竞争抑制可以发生在不同抗原分子之间，也可以发生在同一抗原的不同抗原决定簇之间欲从如此众多的蛋白抗原中找出具有竞争抑制或中和作用的抗原实属不易。 |