猪圆环疫苗质量现场评估之初见

3、配套免疫层析分析仪实现疫苗抗原定量检测

如配合本公司开发的免疫层析定量分析仪检测疫苗中抗原的水平，可以准确知道疫苗中抗原的含量，下图为免疫层析定量分析仪（检测箱）的实物图。该检测箱包括：免疫层析定量分析仪、扫码枪、离心机、加样器、计时器等。小小检测箱包含了检测所需要的所有设备。可谓“一箱在手，说走就走”，使检测工作能够随时、随地的开展，并且是任何人都可以操作。

标驰泽惠实验室采用这个胶体金检测卡（货号G19）检测了市场上9家圆环疫苗，结果发现质量参差不齐。当时未记录抗原的具体浓度，读者可以通过T线（检测线）颜色的深浅来粗略判断抗原的多少，判断规则：颜色越深；抗原含量越高。反之，越少。下图可见，T线颜色深浅不一，说明抗原含量也是参差不齐。因此标驰泽惠实验室建议养殖企业在采购圆环疫苗时，想办法检测一下，选出几家不错的疫苗，根据性价比、服务、口碑等比较后再掏钱。

4、圆环疫苗的检测步骤

圆环疫苗的检测步骤非常简单，一学就会：

检测前疫苗需要预先破乳，可根据疫苗生产商提供的方法处理或者参照下述方法进行预处理。

真核亚单位疫苗：一般是水性佐剂，用圆环抗原稀释液稀释100倍或400倍后再检测，如勃*林格、优*邦、中*博等。

易*邦原核亚单位疫苗：取疫苗0.5ml加入0.5ml柠檬酸钠（20g/100ml），混匀静置30分钟。用圆环抗原稀释液稀释50倍后检测（累计稀释100倍）。

全病毒疫苗：全病毒疫苗一般为油性佐剂。取1ml疫苗，加入0.1ml的破乳剂，震荡30秒，室温静置30分钟。5000rpm离心3分钟，可见油、水分离。吸取下层水相稀释10倍或50倍后检测。

其它疫苗（包括特殊免疫佐剂、特殊工艺、全病毒与亚单位混合苗等）：咨询疫苗供应商处理方法或者参考上述方法处理。

加样反应：取70微升稀释后样品滴到胶体金测试卡的加样孔中，静止20分钟。

结果测量：启动测量仪，连接扫码枪。用扫码枪扫描试剂盒上的二维码，进入检测界面。将测试卡插入仪器中，点击检测即可。测量“结果”为待测样品抗原的浓度（ng/ml），乘以稀释倍数即为水相终浓度。如定性检测，只需目测根据T线颜色深浅判断即可。

二、抗体效价的高低

据报道：中和抗体的缺失或损伤，与PMWS的发生密切相关，在疫苗接种后，病毒血症的减少伴随着中和抗体滴度的升高。种种现象表明，中和抗体在病毒清除、感染后恢复、抵抗病毒的感染等过程中起着重要的作用。但是由于测量中和抗体的不易性，往往临床难以实现。人们现在常常用总IgG抗体的检测取代中和抗体。

1、猪圆环II型病毒抗体测试卡检测原理

虽然理论上讲，总IgG的检测不能代表中和抗体的水平，但是如能够选择更特异性的抗原表位来研制总抗体的检测试剂，对临床应用还是具有一定的帮助意义。

标驰泽惠实验开发的猪圆环II型病毒抗体测试卡（G18），同样基于胶体金检测平台。检测时，待测样品中的抗体与胶体金标记的特异性抗原结合，然后在T线与另外一个抗原结合，形成红色的沉淀线。通过T线颜色的深浅配套免疫层析分析仪计算抗体的效价。该方法操作简单、快速，结果准确。与间接免疫荧光方法相比，总符合率90%以上。下图为猪圆环II型病毒抗体测试卡（G18）实物照片。

2、检测步骤

三步法操作，任何人一学就会，20分钟在现场完成检测。

3、检测意义

1）、评估疫苗免疫后抗体效价水平：疫苗免疫后抗体效价通常在64-256之间，且抗体效价整齐度较好。如抗体效价过低，建议检查疫苗或免疫程序。

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