河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度接触性传染病，主要引起怀孕母猪后期流产、早产，产死胎和木乃伊胎等繁殖障碍，仔猪出现呼吸道症状和断奶前死亡率增高，同时还可引起免疫抑制、继发感染及其他疾病免疫失败等。我国 1996 年首次报道该病，2006 年出现高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV），2012 年首次发现 NADC30-likePRRSV。PRRSV 的不断变异和扩散，给我国养猪业造成了巨大经济损失。目前有关科研机构已开展了 PRRSV 监测、流行情况调查以及基因变异分析等工作。研究发现，NSP2 蛋白作为 PRRSV 最大的非结构蛋白，是 PRRSV 基因组中突变率最高的蛋白之一。该蛋白不连续的 30个氨基酸缺失，常作为 HP-PRRSV 鉴定的依据。PRRSV 结构蛋白中变异最大的是 ORF5 基因编码的糖蛋白 GP5。它是 PRRSV 最主要的保护性抗原蛋白，常作为标记性蛋白用于 PRRSV 流行病学监测。因此，通过对 NSP2 和 ORF5 基因的监控，可以了解 PRRSV 的遗传演化和变异规律。

本研究基于 PRRSV NSP2 和 ORF5 基因，2010—2016 年在河北省开展了 PRRSV 分子流行病学调查，并参考国内外已发表的基因序列，绘制遗传进化树，分析 PRRSV 遗传变异趋势，以丰富我国PRRSV 的分子流行病学资料，进而为 PRRS 防制提供参考。

1　材料与方法

1.1　样品与毒株

2010—2016 年在河北省 10 个地区 18 个发病猪场，采集新鲜猪肺脏、脾脏、肝脏和淋巴结等病料样品。本研究所用毒株见表 1。

1.2　主要试剂

2×Taq PCR Master mix、Marker Ⅲ：购自天根生化科技（北京）有限公司；Primer Script Ⅱ 1stStrand cDNA Synthesis Kit、pMDTM19-T vector、MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0：均购自 TAKARA 公司；Top10 感受态细胞：购自北京全式金生物技术有限公司。

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