猪塞尼卡谷病毒流行态势与诊断防控研究进展

表 1 SVV流行状况统计

2 SVV的鉴定和诊断

鉴于SVV快速传播的能力，建立高效、准确的诊断方法是进行该病防控的前提。目前已经用于诊断SVV的实验室方法包括病毒分离、病毒中和、竞争ELISA、常规RT-PCR和实时荧光RT-PCR (rRT-PCR)等方法。2007年在加拿大猪中检测到SVV后，迫切需要开发一种能够用于检测SVV的便捷、可扩展的血清学诊断方法。制备出SVV特异性单克隆抗体(mAb)显得尤为重要，借助制备的mAb可以开发SVV竞争性酶联免疫吸附检测方法(cELISA)或免疫组织化学反应。针对2007年加拿大发生的SVV疫情，Yang等制备了反应性很高的mAb，并成功开发了针对SVV的cELISA检测方法，证明其可用于猪体内SVV抗体的检测，并且与其他小RNA病毒没有交叉反应。然而，由于当时SVV阳性血清数量的限制，该检测方法并未得到充分验证。因此，在2015年大面积暴发SVV疫情后，Goolia等对先前开发的cELISA进行了进一步验证，同时还建立了病毒中和试验(VNT)方法以确保SVV的准确诊断。在开发VNT检测方法过程中，将cELISA、VNT和明尼苏达大学兽医诊断实验室建立的免疫荧光抗体检测(IFAT)方法进行了SVV检测的比对，对273份SVV阳性血清和1 014份阴性血清进行了检测。结果显示，cELISA的诊断特异性和敏感性分别为98.2% (97.2%-98.9%)和96.9% (94.5%-98.4%)，VNT为99.6% (99.0%-99.9%)和98.2% (95.8%-99.4%)，IFAT为100%和90%。当基于卡帕系数(Kappa coefficient)进行比较时，cELISA、VNT和IFAT检测结果之间有很好的关联性和一致性。此外，该研究还证明建立的VNT方法对FMDV、VSV和SVDV并无交叉反应，具有很好的特异性。建立的cELISA同样与FMDV、VSV和SVDV无交叉反应，与VNT结果相符，表明100%检测特异性。对IFAT、cELISA和VNT三种方法进行系统的比较表明均可用于SVV的检测。但在实际检测过程中，cELISA要优于其他两种检测方法，因为它的操作更快更简单，成本更便宜，不依赖显微镜观察，适用于大规模样本检测，因此可用于常规畜群的筛查。VNT和IFAT可作为进一步确诊方法，与cELISA结合使用。

除了血清学检测方法，针对SVV基因组的PCR检测方法也可以快速进行SVV的诊断。SVV的RT-PCR检测方法的建立对SVV的发病机制和流行病学研究具有重要意义。RT-PCR检测方法可以对SVV在环境的分布及传播的路线进行调查，对病毒在其他宿主中进行监测，鉴定新的传播媒介和途径，也可以进行组织嗜性和病毒载量分析。3D基因是SVV基因组中最为保守的区域，因此针对3D基因建立的RT-PCR方法比针对其他基因的检测方法灵敏度更高。现在已经建立了针对3D基因的实时RT-PCR方法，并证明其可以广泛用于SVV的检测。除了针对3D基因的RT-PCR，现在还建立了针对VP1的RT-PCR。

虽然针对SVV检测的VNT和cELISA方法已经建立，并且具有很好的特异性和灵敏性，但这些方法目前仍局限于实验室内部使用，未能推广应用。然而基于SVV基因组检测的RT-PCR方法可以快速推广使用，应用到SVV的流行病学调查及基础研究中。进一步研发可大范围推广使用的血清学诊断方法对于SVV的防控依然非常紧迫和重要。将不同种检测方法结合使用确保诊断结果的准确率和可信性，能够为SVV的防控提供有力保障和支持。

3 SVV疫苗的研发

控制传染病最主要的手段是预防，而利用疫苗免疫进行预防是最为有效的措施，但目前仍然无可以推广使用的SVV商品化疫苗的报道。堪萨斯州立大学Chen等以SVV美国流行毒株KS15-01基因组为模板构建了SVV全长cDNA，并进一步建立了SVV感染性克隆pKS15-01-Clone，希望借助构建重组病毒，然后对病毒蛋白位点进行突变修饰开发出高免疫效力、无致病性的重组活病毒疫苗。感染性克隆的重要用途之一是能够作为外源基因表达的病毒骨架。然而插入增强型绿色荧光蛋白EGFP的示踪病毒是研究病毒生物学特性、发病机理和标记疫苗的重要工具。Chen等成功将EGFP的表达序列插入到SVV的2A和2B之间，获得了能够表达EGFP荧光蛋白的SVV重组病毒。该重组示踪病毒的获得为SVV致病机制研究和重组病毒疫苗的研发提供了非常好的研究材料。

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