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443、培养基制作的一般要求：
（1）培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称取的份量务必准确。
（2）培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6，呈弱碱性。
（3）培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。培养基经灭菌后，必须置37℃温箱中培养24小时，无菌生长者方可应用。
（4）所用器皿须洁净，忌用铁或钢质器皿，要求没有抑制细菌生长的物质存在。
（5）制成的培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的变化。
444、不同的细菌培养基制备方法不同，但制作过程一般包括以下步骤：
（1）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。
（2）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。
（3）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。
（4）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。
（5）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。
445、一般保存病毒毒种的最佳温度是-70℃。
446、细菌鉴定的基本方法（从几个方面鉴定细菌）：
（1）菌落形态观察：观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地和干湿度。
（2）染色镜检：按照革兰氏染色或瑞氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、镜检；干燥后，用油镜观察。
（3）常见的生化鉴定：如糖发酵试验、吲哚（靛基质）试验、淀粉水解试验、V-P试验、甲基红（M、R）试验、柠檬酸盐利用试验、硝酸盐还原试验、接触酶试验、氧化酶试验。
（4）血清学鉴定：检定抗原型或血清型。
（5）分子生物学鉴定：利用分子生物学手段进行细菌的种属、亚型的鉴定。
（6）动物试验：测定致病性或毒力。
447、琼脂扩散试验判定标准：
进行抗体检测时，可将已知抗原置中央孔，周围1、3、5孔加标准阳性对照，2、4、6也分别加待检血清，待检孔与阳性孔出现的沉淀带完全融合者可判为阳性，待检血清无沉淀带或所出现的沉淀带与阳性对照沉淀带完全交叉者判为阴性，
448、琼脂扩散试验结果判定，阳性对照与被检血清孔之间出现沉淀线，其末端不与阳性沉淀线相连，不可以判定为阳性反应。
449、琼脂扩散试验中，有的受检样品产生2条沉淀线，其中一线与已知抗原（抗体）的沉淀线融合者仍判为阳性反应。
450、在对未免疫动物种群进行流行病学调查时，抗体水平应该作为主要的感染依据。
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