预防兽医
流感病毒的分离鉴定与疫苗制作
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许多养殖场和兽医想了解流感病毒分离、鉴定和疫苗制作的相关知识？其实，这些不过是专业课的基本知识，不是什么高科技，在网上也很容易搜到，今就有关这些网上都能查到的信息与大家分享，希望能起到点抛砖引玉的作用。 一、禽流感病毒的分离 如果你发现或怀疑鸡群有流感的侵入，如果想尽快分离出病毒，首先需要确诊，这个确诊的意思就是需要捕捉到病毒，而不是拿把剪子，一剖检，有心冠脂肪出血、胸腺出血，或者腺胃出血、肠道出血，或者将肠道出血分为不是枣核样肿胀或出血、而是长堤样肿胀或出血之类，就说是有流感或不是流感，最好此时能将流感病毒直接捕捉到。 确诊流感的方法有很多种，基因扩增是最常用的方法。它是利用聚合酶链式反应（PCR）来扩增病毒基因的，有专门的PCR仪来做这个东西，然后将扩增好的病毒基因片段跑胶再观察有没有特定的基因片段来确诊，一套此类设备根本其具体情况，需要几万元到几十万元不等，一些大型鸡场和种禽企业现在已配备有这些东西。目前还有一种简单的方法是用禽流感新城疫病毒快速诊断试纸，这个东西的原理与妇女用的早孕试纸差不多，便宜而且准确度很高，好的产品能一条试纸检测禽流感和新城疫病毒，其灵敏度能达到0.031个血凝单位和3×10的负三次方EID50（半数感染量），非常适用于基层兽医或鸡场使用。尽管从理论上说，PCR检测要比试纸准确得多，但实际应用中， PCR法因为不同的人操作手法不同，使用设备多，试剂使用较多，步骤也很多，稍有一步失误或设备小故障，就会得出不同的结论，所以从这个意义上说，好的试纸反而比PCR“准确度“高，一些省的畜牧局检测兽医也反映这些情况，而且他们还列出了很好的数据对比表。不过这反映的是实用性的问题。 如果能使用好的试纸检测出病鸡身上有流感病毒，那么你分离到这个病毒的概率就能高达80%以上，如果你看着病理的症状非常明显，但检不出病毒，你分离病毒的概率就低于10%了，甚至一些技术熟练的兽医，当检测不了病毒时，就根本不去做病毒分离工作。 病毒首先要采集病料，一般采集病毒较多的器官，比如气管、肺、大脑、输卵管、腺、肾等，采下来后，要及时剪碎、研磨，反复冻融，让细胞或组织破裂，以释放出病毒粒子来。然后进行除菌过滤，就能进行接种了。 接种一般采用无特定病原体的鸡胚（SPF胚），也可以采用低免胚。流感分离的要求不太高，但新城疫要求却要高很多。 将病毒液接种鸡胚后，有时鸡胚会很快死亡，这时的鸡胚液不要扔掉，可以再传代。一般过几代就会传出来，这个过程如果需要，也可以不断地利用PCR设备或试纸来检测接种的效果。不过对于当前的病毒来说，只要检测到病毒，一把就能分离出来的概率就较高，当然这个过程也需要一些技巧，需要一定的练习。不是说，不是什么高科技就一看就会，就不需要学习和练习了，必要的专业知识和专业技能还是需要的。 二、病毒的鉴定 拿到流感病毒就可以更好地鉴定了，鉴定有很多种方法，也可以使用最简单的禽流感试纸来检测，但是进一步的禽流感分型工作，则不能使用这个方法，这是因为东亚地区的流感变异特别快，相应的H5、H7、H9的单克隆抗体没有做出来，而旧有的单克隆抗体已不能鉴定一些新的变异株了。所以禽流感的亚型分型工作主要靠基因扩增或测序工作来做。当然也可以利用单因子血清来说，不过这种方法比较粗糙。基因扩增法主要是将病毒的特征基因片段扩出来。如果有这些就说它是那个亚型的病毒，如果没有，就说不是。如果想了解病毒片段的内部信息，就需要将这些片段用仪器读出来，也可以将病毒的所有片段的信息都读出来，然后进行整体性的研究，也可以与多个病毒株的基因进行比对建立基因进化树等。 |
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