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盐酸克伦特罗检测方法研究进展
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3.2 气相色谱-质谱法(GC-MS) GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g[6];Pteer Batioens应用气相色谱-串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g[7];刘琪等用GC-MS法(EI离子源)检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL;VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法(NY/T468~2001)。 3.3 毛细管区带电泳法(CE) CE法非常适用于那些难以用传统的液相色谱法分离的离子化样品的分离与分析，其分离效率可达几百万理论塔板数。其优点是：具有很大的灵活性，许多分离参数(如缓冲液的组成和pH值、毛细管的类型以及所使用的电场的波形等)都可以调节，操作简便，所需样品量极少，一般只需几纳升(如Gause-pohl C等应用CE技术检测人尿中CLB的残留，最低检测限达到0.5ng/mL)，而且精确度、准确度均已符合生物样品中残留物的检测标准;缺点是检测时间较长，需较复杂的仪器。另外不足之处是目前尚缺乏合适的、配套的检测器，因此，只有研究、开发灵敏度更高的检测系统，CE法的优势才能充分发挥出来。 3.4 免疫分析技术(IA) 标记免疫分析技术是“迈向21世纪的医学检验技术”之一，其发展趋势是：新标记物的发展与联合应用、单克隆以及基因工程抗体的应用及免疫放大技术，可明显提高检测特异性，敏感度可达zepto(10-20)、yocto(10-24)水平，即可实现分子水平的检测。 3.4.1 放射免疫分析技术(RIA) 放射免疫分析法具有特异性强，灵敏度高，准确、快速，操作简便，易于标准化等优点。Ropitar和Zimmer首次报道用于β-肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中CLB的药理学研究。Boyd等应用基质固相分散法与放免法结合对肝脏中CLB残留作了检测，检测中用3H标记克伦特罗，检测限达0.5ng/g，回收率大于70%。目前国外已生产出运用RIA测定CLB的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这种方法是用受体代替抗体结合CLB，检测限可达到2.4ng/g。但是由于放射免疫分析法需要较昂贵的液体闪烁仪或Y-放射仪，且放射性同位素对工作人员有一定的伤害，废弃物又不易处理，这些不利因素限制了该法的广泛应用。 3.4.2 酶免疫分析技术(EIA) 目前，检测CLB较高效的免疫分析技术是ELISA技术。早在1992年，Oriundi就通过ELISA法对尿液和血清中的β-兴奋剂残留进行直接分析，该方法既适于实验室大量样品的检测，也适于屠宰场地少量样品的迅速检测。Sawaya W N等运用ELISA检测了绵羊尿和眼组织中CLB的残留情况，结果最大残留检测限分别为0.272ng/mL和1.5ng/g，但假阳性率较高，检出阳性者需用GC-MS法确证。Degand等建立的直接竞争ELISA，将抗原用辣根过氧化酶(HRP)标记，与抗CLB的单克隆抗体竞争结合，其检测限可达0.05ng/g，最高可达0.003ng/g。目前，英国的Randox Laborato-ries Ltd和德国的r-biopharm公司均开发出了检测肉品、饲料中CLB残留的ELISA试剂盒。中国在应用EIA检测CLB方面的研究起步晚，但近几年取得了明显的进展，目前已有几种试剂盒研制开发成功。叶妮等对中国兽药监察所研制的试剂盒进行了测试，结果表明该试剂盒与德国r-biopharm公司生产的CLB ELISA检测试剂盒有相当的可比性。EIA的优点是灵敏度高、操作简便、检测迅速、价格便宜;缺点是仍不能实现现场检测，而且假阳性率高。 4 CLB检测技术的未来趋势和发展方向 根据目前国内外检测CLB各种方法的进展情况以及CLB滥用及残留的严峻性，建立一种克服上述各种检测方法缺点的简便、快速、准确、可实现现场检测的测定CLB技术势在必行。生物传感器技术(Biosensor，BS) 和滴金免疫技术(DIGFA)是两种快速、高效的残留物分析技术，如能研究、开发运用到检测生物样品中CLB的残留可能会产生理想的效果。 |
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