雏鸭病毒性肝炎的诊断及防治

1.4.3 琼脂免疫扩散 许伟琦等选择接毒后48～72h死亡的含毒量最高峰时期的鸡胚体作为抗原材料，通过反复研磨冻融和超声波裂解使抗原成分充分暴露，并用氯仿抽提除去类脂质和杂蛋白，以PEG透析和硫酸铵沉淀法来浓缩和纯化病毒，克服了非特异性反应，并在琼脂糖板内加入2% PEG，大大加快沉淀反应，24h即能做结果判定，而且提高了沉淀线清晰度。

1.4.4 胶体金标记 程安春等用经过初步提纯的DHV制备的高免血清经过非特异性吸收，同时对观察用的病毒样品及抗血清用前经13000r/min处理，去掉一些杂质，使制备的免疫胶体金样品在电镜视野下基本看不到杂质，非常清晰，用胶体金免疫电镜技术和直接电镜（DEM）、免疫电镜（IEM）比较观察了鸭肝炎病毒，观察到待检病毒，免疫胶体金比DEM、IEM法清晰。视野中附着金颗粒的病毒量多，很容易就观察到，而不像DEM和IEM那样，由于背景杂质多，景像不清，病毒量少，镜下寻找较困难。胶体金免疫电镜技术是在免疫电镜基础上，加进在电镜下具有强烈反差的金颗粒，故大大提高了检测效果。胶体金免疫电镜技术可用于检测鸭病毒性肝炎病毒，具有简便、快速、灵敏、直观等特点，可作为快速检测鸭病毒性肝炎病毒的常规方法。

张小飞等用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（DHV）IgG，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测DHV的斑点免疫金渗滤法（DIC-FA），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，其敏感性为抗原斑点试验（AST）的2倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明DIGFA检测DHV具有较高的特异性。对DHV鸡胚尿囊液DIGFA法检出率为100%。DIGFA法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测DHV方法。

1.4.5 SPA协同凝集试验 SPA是大多数金色葡萄球菌细胞壁上所含的一种主要成分。SPA能天然地和人类IgG分子Fc段结合的特点，克服了ELISA中酶标抗体或酶标抗体特异性的局限。酶标SPADotBlotlmmunoassay简化了DHV的抗原、抗体的免疫检测方法，对筛选DHV病毒的敏感细胞株和单克隆抗体的特异性检测等，在特异性、重复性及定性、定量等诸多方面，都获得了较满意的效果。

1.4.6 ELISA诊断法 其优点是灵敏度高，操作简便，特异性强。

ELISA双抗夹心法 陈溥言等建立了ELISA双抗夹心法以检测病毒，将其研制的单抗应用于病毒的检测，能够灵敏地检测病毒样品。

单抗捕捉法ELISA 孙泉云等将单抗的高度特异性与ELISA的高度灵敏性结合起来，建立了用以检测DHV抗体的单抗捕捉法ELISA方法。该法能有效区分阴、阳性血清，非特异性背景很小。同时对抗原的纯度要求也很低，甚至是尿囊液也能克服非特异性反应。

酶标Dot-ELISA 杨奎等采用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在纯化的DHV上，建立了酶标Dot-ELISA法用于检测DHV抗体。与以Polyvinyl板或Polystyrene为固相载体的ELISA法相比，酶标Dot-ELISA方法抗原用量少，很适于DHV这类难以提纯的病毒的抗体的检测。马秀丽等采用过碘酸钠法用辣根过氧化物酶标记纯化的Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体建立了检测Ⅰ型鸭病毒性肝炎的Dot-ELISA方法。该方法简便易行，特异性好，与鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鸡传染性囊病病毒、鸡新城疫病毒等无交叉反应，重复性高，对病毒尿囊液的最低检出范围为1∶16，而对肝脏病料的最低检出范围为1∶160。该方法可用于临床发病鸭的检测。

间接ELISA 杨萍萍等制备了鸡抗DHV高免血清，并成功地用葡聚糖凝胶柱层析纯化抗原包被酶标板，建立了检测鸡抗DHV血清抗体的间接ELISA方法，经交叉试验和阻断试验表明，该方法具有很高的敏感性和特异性，应用于DHV抗体检测比较有效。

由于鸭肝炎病毒有多种血清型并且病毒难以分离和纯化，至今没见其他关于DVH的分子生物学诊断方法的报道。

2 防制措施

目前还没有有效的化学药物对雏鸭病毒性肝炎进行治疗，因此该病重在免疫预防。

2.1 主动免疫

2.1.1 弱毒疫苗 程安春等将DHV通过鸡胚连续传代致弱而获得疫苗株，对种鸭和雏鸭进行免疫。种鸭在收集种蛋前2～4周注射疫苗，雏鸭于3周内可获得母源抗体保护，一般免疫期为6个月，5～6个月后应考虑第二次免疫;雏鸭在1日龄免疫弱毒疫苗，3～7天可产生免疫力，但母源抗体可影响效果，对有母源抗体的1日龄雏鸭采用口服免疫的效果优于注射免疫。但由于某些地区出现Ⅰ型变异株疫情，用标准DHVI型弱毒疫苗或其抗体控制的效果呈现明显的多样性，部分基本可以控制，部分控制效果很差。这就是目前部分地区采用标准鸭肝炎Ⅰ型（DHV I型）的弱毒疫苗免疫效果不好的原因。

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