雏鸭病毒性肝炎的诊断及防治

鸭病毒性肝炎（duckvireshepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（duckhepatitisvires，DHV）引起的雏鸭急性败血性、高度致死性传染病，其特征是患鸭呈现沉郁、转圈、抽搐、角弓反张等神经症状，并具有肝脏肿胀、出血，胆囊充盈，胆汁颜色变淡等病理变化。鸭肝炎呈世界分布，其病原具有三个抗原性互不相关的血清型（血清Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型）。我国自1958年在上海发现本病至1996年前后，各地暴发与流行的鸭肝炎病原均属于标准DHV-I型，其疫情可以被标准DHV-I型疫苗及抗体良好控制。1996年福建林世棠报道在福州地区发现不能被标准DHV-I型疫苗保护的鸭肝炎，1997年3月广东珠江三角洲及其附近地区大面积暴发典型DVH，在使用传统标准DHV-I型弱毒疫苗及其蛋黄抗体防制时，控制结果出现多样性。部分疫情可以用标准DHV-I型高免蛋黄抗体控制，免疫保护率达95%以上;部分疫情用标准DHV-I型高免蛋黄抗体控制不力，往往需要重复注射抗体1～2次，免疫保护率在75%左右;部分疫情用标准DHV-I型高免蛋黄抗体控制的效果很差，发病死亡率在80%～90%，但使用本地分离强毒制备的高免蛋黄抗体或高免血清则可控制。珠江三角洲及其附近地区正在大面积流行DHV-I型鸭肝炎，其部分毒株的毒力有所增强，其抗原性发生了变异，使得所流行的DVH发病日龄、发病死亡率均有增大倾向，采用DHV-I标准毒株的弱毒疫苗或相应高免蛋黄抗体的防制效果出现多样化，甚至常发生免疫失败。因此，建立有效准确的诊断方法和防制对策对本病的预防有重大意义。

1 诊断

1.1 临床诊断

本病主要感染3周龄以内的雏鸭，3～10日龄的雏鸭为高易感群体。潜伏期很短，为1～4天，雏鸭突然发病，开始时病鸭表现精神萎靡，不能随群走动，眼睛半闭，嗜睡。出现这些症状1～3h后表现神经症状，运动失调，身体倒向一侧，双腿作痉挛性运动，呈角弓反张姿态，俗称"背脖病"。通常在出现神经症状后，十几分钟即死亡。有些发病急的病雏鸭往往突然倒毙，常看不到任何症状。

1.2 病理变化

本病的主要病理变化是在肝脏。肝肿大，质脆，色暗或发黄，肝表面有大小不等的出血斑点。多数病鸭的肾脏发生出血和肿胀，胆囊肿胀。组织学变化的特征是肝细胞变性和坏死，部分肝细胞脂肪变性。

1.3 病毒分离

Ⅰ型鸭肝炎病毒分离可无菌采取雏鸭肝脏制成悬液，加氯仿，离心取上清液，经尿囊腔接种8～10日龄鸡胚或10～14日龄鸭胚，观察胚体的病变和死亡情况，收集尿囊液。用病料或收获的尿囊液经肌肉接种易感雏鸭，经24～48h死亡，若具有DVH的典型特征和症状，并且也能从死亡雏鸭中分离到病毒，即可证实此病。也可用直接荧光抗体技术在自然病例或接种鸭胚的肝脏上进行快速、准确的诊断。

Ⅱ型鸭肝炎病毒分离较困难，需要在鸡胚尿囊腔内连续传代。敏感雏鸭对Ⅱ型DVH攻击的反应是多种多样的。Ⅱ型鸭肝炎病毒最可靠的诊断方法是用电镜观察肝匀浆，检出星状病毒。

Ⅲ型鸭肝炎的检测方法是对10日龄的鸭胚经绒毛尿囊膜接种病料，观察接种部位和胚胎的病变。

1.4 血清学方法

血清学方法包括用鸡胚、鸭胚、雏鸭以及用细胞培养的病毒进行中和实验、被动血凝实验、间接血凝实验、胶体金免疫电镜技术、SPA协同凝集试验，以及酶联免疫吸附实验等。

1.4.1 血凝实验 孙泉云等粗提DHV经Sephadex6200柱层析纯化后作为致敏用抗原，戊二醛法固定绵羊红细胞、BDB法致敏抗原红细胞，建立了检测DHV抗体的间接血凝试脸，其最佳致敏条件为：50%醛化红细胞0.1ml，BDB2ml，DHV抗原0.5mg，37℃15min。本试验还对不同鸭血清的IHA抗体及免疫雏鸭的抗体水平等进行了检测，经与中和试验比较，阳性结果符合率较高。

1.4.2 中和实验 秦智锋等将鸭病毒性肝炎病毒（ATCC株）用鸡胚传一代后，测出此病毒的鸡胚半数致死量（ELD50），通过多次重复试验，建立了利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎（DVH）的诊断方法。雏鸭中和试验是在本体动物上进行试验，灵敏度高，判断准确。特别是鸭体本身的症状与病变对于确证该病非常有说服力。且与鸡胚中和试验相比，其所需周期短，操作相对简单。但由于个体之间的差异，各个体之间相对抵抗力不同，所以重复性较差。鸡胚中和试验操作简便，其死亡的胚体病变也具有特征性。但有些分离到的病毒不能初次就在鸡胚上增殖，需盲传2～3代后方有特征性的病变。此外，鸡胚试验所需时限长，不能适应快速诊断的要求。

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