预防兽医
动物基因工程疫苗研究进展
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4、合成肽疫苗 合成肽疫苗(synthetical peptide vaccine)也成为表位疫苗（epitope vaccine），是用化学合成法人工合成类似于抗原决定簇的小肽(约20～40个氨基酸)。 合成肽疫苗分子是由多个B细胞抗原表位和T细胞抗原表位共同组成的，大多需与一个载体骨架分子相耦联。合成肽疫苗的研究最早始于口蹄疫病毒(FMDV)合成肽疫苗，主要集中在FMDV的单独B细胞抗原表位或与T细胞抗原表位结合而制备的合成肽疫苗研究。虽然取得了一定的进展，但仍未获得一种具有理想保护作用的合成肽疫苗。分析合成肽疫苗免疫效果不佳的原因主要有[12]：(1)疫苗缺乏足够的免疫原性，很难如蛋白质抗原那样诱导集体的多种免疫反应；(2) B细胞和T细胞抗原表位很难发挥协同作用；(3)缺乏足够多的B细胞抗原表位的刺激。针对提高合成肽疫苗的免疫原性，进行了许多研究，如独特型肽疫苗、热休克蛋白—肽复合体疫苗等。一般来说单独的抗原决定簇的免疫原性较弱，所以通常要与载体偶联，或以融合蛋白的形式进行免疫，还可以与细胞因子一起作用，以提高免疫原性。试验证明，热休克蛋白—肽复合体可以诱发很强的细胞反应，有持续时间较长，又有记忆功能且不需要佐剂等优点。 目前针对乙型肝炎病毒、狂犬病病毒、人脊髓灰质炎病毒、鸡新城疫病毒、吁肠孤病毒以及委内瑞拉马脑炎病毒等的抗独特型抗体的研究较为活跃，其中针对乙型肝炎病毒表面抗原和呼肠孤病毒S1抗原的抗独特型抗体在实验动物上已证明具有很好的保护作用。另外，针对仙台病毒特异性T淋巴细胞受体的抗独特型抗体可以在小鼠引起细胞毒性T细胞应答，并能保护小鼠抵抗病毒攻击。与传统的疫苗相比，由于抗独特型抗体较天然的病毒抗原免疫诱导的中和抗体水平低．故抗独特型抗体在应用时、也需要与一定的载体如钥孔虫戚血蓝蛋白或LPS进行偶联，或交联后附以佐剂并采用适当的剂量进行免疫。此外、抗独特型抗体疫苗制造方法较为复杂、有异种蛋白副反应。抗独特型抗体疫苗在应用到实际之前尚需做很多工作，但具有传统疫苗不能取代的作用[13]。 5、转基因植物可食疫苗 转基因植物可食疫苗（Transgenic Plants Edible Vaccines）是利用分子生物学技术利用，将病原微生物的抗原编码基因导入植物，并在植物中表达出活性蛋白，人或动物食用含有该种抗原的转基因植物，激发肠道免疫系统，从而产生对病毒、寄生虫等病原菌的免疫能力。 与常规疫苗相比较，转基因植物疫苗具有独特的优势：(1)可食用性，使用方便。将表达抗原的植物直接伺喂动物，给药过程非常方便，避免了繁琐的免疫程序；(2)生产成本低廉，易大规模生产。只需适宜的场地、水、肥和少量农药，不需严格的纯化程序；(3)使用安全，没有其他病原污染。其他疫苗在大规模细胞培养或繁殖过程中，很容易发生病原微生物特别是霉形体的污染，而转基因植物疫苗不存在这一问题，植物病毒不感染人和动物；(4)转基因植物能对蛋白质进行准确的翻译后加工修饰，使三维空间结构更趋于自然状态，表达的抗原与动物病毒抗原有相似的免疫原性和生物活性；(5)投递于胃肠道粘膜表面，进入粘膜淋巴组织，能产生较好的免疫效果。传统的非经肠道疫苗几乎不能产生特异的粘膜免疫。 尽管转基因植物生产基因工程疫苗有许多优点，但就目前技术而言，仍存在疫苗在植物中的表达水干较低、提纯困难、口服时有被消化可能等问题[14,15]。 利用转基因植物生产人用或兽用疫苗已受到科技界和国际社会的高度重视，被很多国家和地区列为重点发展的高科技项目之一，因此有广阔的应用前景。 目前,国外已经有将乙型肝炎病毒表面抗原(Hb-sAg)、 变异链球菌表面蛋白(SPaA) 、大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位(LT-B)、霍乱毒素B亚单位(CTB)， Norwalk病毒衣壳蛋白(NVCP)、狂犬病病毒糖蛋白、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、口蹄疫病毒(FMDV)、免出血病病毒(RHDV)在植物中表达的报道，而国内在转基因植物可食疫苗方面的研究的报道甚少。 6、抗独特型疫苗 抗独特型疫苗(anti-idiotypic vaccine)免疫调节网络学说发展到新阶段的产物。抗独特型抗体可以模拟抗原物质，刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等效应的抗体，由此制成的疫苗称为抗独特型疫苗或内影像疫苗(internal image vaccine)。 抗独特型疫苗的有许多优点：(1)可以不接触活的病原微生物及其组成成份，因而很安全；(2)用杂交瘤细胞在体外产生大量单克隆抗独特型抗体比较容易，花费小，生产周期短．浓缩纯化简单便；(3)抗独特型疫苗较非活化病毒能诱导更多的活性T、B细胞反应；(4)抗独特型疫苗对新生儿有特别价值；(5)抗独特型疫苗仅启动其携带内影像抗原决定簇的抗体反应；(6)能模仿选择性抗原决定簇使其被工程化。同时，独特型疫苗也存在的许多问题：(1)最困难的是在很多可能的抗独特型抗体中选择特异的抗独特型抗体(2)很难预抗独特型疫苗产生免疫反应或免疫耐受，(3)抗独特型抗体是异种蛋白，重复免疫人可致血清病，(4)抗独特型疫苗免疫还不能提供完全的保护，(5)由于抗独特型网络的复杂性，当一些抗独特型抗体活化保护性免疫时，另一些抗独特型抗体可能启动病理性反应。 目前已有许多研究工作用抗独特型抗体制作的实验室疫苗，接种动物能抵抗病原的感染，如伪狂犬病病毒、牛疱疹病毒-Ⅰ、新城疫病毒和弓形虫等[16]。抗独特型抗体疫苗目前尚处于实验室阶段，达到临床使用的研究目标依然任重道远。 基因工程疫苗技术是一项新兴的具有应用前景的生物技术。我国兽医生物技术的发展虽然面临许多问题，但从长远来看前途还是光明的。研制畜禽用疫苗的首要原则就是要获得巨大的经济效益和社会效益。多联或多价疫苗能降低生产成本、简化免疫程序，并且多联苗还可克服不同病毒弱毒苗间产生的干扰现象，因此将是畜禽基因工程疫苗的主要发展方向。 |
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