临床兽医
如何提高PRRS诊断的准确率？
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至于样品保存的温度，学者们也开展了很多研究。Benfield等将VR2332株混于实验室培养基中37℃孵育12小时后，病毒对CL-2621细胞的侵染性降低了50%；孵育48小时则完全失活。然而，病毒在4℃保存30天或-70℃保存4个月其侵染性不受影响。Bloemraad等使用另一个分离株CDI-NL-2.91进行试验发现，-20℃和-70℃条件下，pH值为7.5的培养基中病毒能够长时间保持稳定。温度较高条件下，4℃时病毒的半衰期约为139小时，37℃仅为1.4到3小时。4℃条件下，当pH值为6.25时病毒的半衰期最长，为50小时；pH值8.5时最短，为33.3小时；pH5.0时则为18.8小时。因此采集样品后应尽可能保存在4℃或更低的温度条件下。 三、检测方法的选择 PRRS的诊断又可分为对病原的诊断和对抗体的诊断： 检测PRRSV的方法主要包括病毒分离和PCR方法。其中病毒分离因周期较长，因而限制了该访法的应用范围。PCR方法检测周期短、敏感性高、特异性好，在实际生产中应用较为广泛。 现有的检测PRRSV特异性抗体的方法包括间接荧光抗体检测(IFA)、血清病毒中和试验(SVN)、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。其中，IFA,SVN和ELISA检测是现阶段北美兽医诊断实验室采用的检测方法。 IFA具有高度的特异性(99.5%)，但不同动物个体的敏感性不确定。与ELISA相比，IFA的优势在于能够确定抗体滴度。根据试验中血清的初始稀释度，滴度为16或20视为阳性。然而由于结果为主观判定，不同实验室或检测员进行检测时IFA滴度终点会有差异。这也限制了IFA在小规模样品检测上的应用。此外，由于PRRSV抗原的多样性，检测所用的PRRSV毒株不同，检测结果也会不同(阴性vs阳性，或滴度)。 最近出现了检测PRRSV特异性IgM抗体的IFA方法。这种方法可用于检测急性/最近发生的PRRSV感染，滴度16或20为阳性。很有意思的是，研究表明IgM阳性样品中81%的样品可分离到病毒。然而，值得关注的是该方法存在由非特异性IgM引起的假阳性结果，因此该方法在广泛用于常规诊断之前必须对其所有的实验性能包括特异性和敏感性进行评估。 ELISA的不同形式包括：采用样品与阳性比值的间接ELISA，直接采用OD值的间接ELISA和阻断ELISA。IDEXX ELISA试剂盒检测样品，S/P值等于或高于0.4时为阳性。据报道，该方法灵敏而特异，敏感性为100%，特异性为99.5%。 尽管S/P值与IFA滴度间可能存在关联，但生产商不推荐以这种方式来解读S/P值。许多兽医诊断学家和从业者认为S/P值为2.5或以上即表示最近发生或正在发生感染。自动化操作是该方法的一大优势，因为自动操作差异小，且易于实现高水平的质量控制。此外，ELISA还有其他优点：a）欧洲株和美洲株PRRSV抗体均可检测；b) 检测周期短；c) 通过USDA和AgCanada认证。 SVN检测也是一种特异性检测，但以前的试验显示SVN的敏感性低于IFA和ELISA方法。目前，滴度4视为阳性。最近的研究显示被测血清中加入新鲜猪血清可提高SVN检测的敏感性。即便如此，SVN方法也最好作为一种研究工具而非常规诊断手段来使用。 四、血清学检测的意义 试验感染PRRSV的猪，IFA, ELISA, SVN首次检测到病毒特异性抗体IgG的时间分别为感染后7-11，9-13和9-28天，达到高峰的时间则为感染后30-50, 30-50和60-90天。感染后5天内检测到PRRSV特异性IgM抗体，并可维持到感染后21-28天。实验和田间观察显示IFA, ELISA和SVN检测抗体滴度通常分别在4-5个月，4-10个月和12个月时降至不可检测水平。未接触过该病原的猪接种疫苗后抗体也呈现相同的时间模式。 基于Rollings Laboratory对30,000份血样的检测结果，我们得到以下关于PRRS的信息： 1） 未免疫小母猪，后备公猪和成年种猪的S/P值<2.25，显示在采血时可能有病毒血症。血清S/P值在3.5到5.0之间或高于5.0时，很可能为最近感染的猪。未成年猪上也观察到相同情况。 |
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