临床兽医
猪圆环病毒感染诊断方法
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3 猪圆环病毒感染的实验室诊断 3.1 电镜法 利用电镜技术可以直观、准确的鉴别病毒，根据病毒本身所具有的形态、结构和大小等不同特征，可即刻做出诊断。Stevenson首次在透射电镜下对被PCV-2持续感染的PK-15细胞内的PCV-2进行超微结构的观察，并详细描述了在细胞的细胞浆与细胞核内的病毒包涵体及病毒粒子的形态。郎洪武从发病猪的脾脏和淋巴结组织的超薄切片中观察到了大量直径17 nm、圆形、无囊膜的PCV病毒粒子。 3.2 免疫组织化学检测技术 Sorden等采用纯化的PCV-2抗原免疫兔子，得到兔抗PCV-2高免血清。利用此高免血清结合福尔马林固定石蜡包埋组织中的PCV-2抗原，再采用生物素标记的抗兔二抗与兔血清结合，最后用过氧化物酶标记的链霉素染色。他们应用此法发现阳性细胞内存在大量浓染的圆形结构，大小和形状与包涵体相似。Chianini等也用兔抗PCV-2的阳性血清建立了免疫组织化学(immunohistochemistry)检测技术。Magar等为了克服内源性过氧化物酶对检测结果的影响，将过氧化物酶标记的第二抗体改用免疫胶体银标记，取得了更好的检测效果。 3.3 免疫荧光技术 免疫荧光技术(immunofluorescence assay，IFA)可用于PCV的抗体检测及抗原组织定位的研究。Allan利用接免疫荧光来检测PCV，就是将组织病料以盖玻片在PK-15细胞中培养，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清与细胞培养物中的PCV 反应，可对PCV 进行检测和分型。崔尚金等[1]将接种PCV-2且经多次传代的PK-15细胞分散到96 孔细胞培养板上，制成抗原诊断板，检测血清中PCV-2的抗体。现在一般认为IFA是实验室检测PCV-2的一种快速、灵敏、成本低的方法，但操作上较复杂，不宜作为临床快速诊断。 3.4 酶联免疫吸附试验诊断方法 酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)可以检测抗体，也可以检测抗原，具有灵敏、简单、快捷的特点。采用Walker等的竞争ELISA来检测PCV-2抗体，此法的检出率为99.58%。Allan等也利用单抗建立了抗原捕获ELISA来检测PCV-2特异性抗体。琚春梅等[2]利用PCV-2-ORF2基因原核表达产物建立了ELISA检测方法。崔尚金等[3]以重组杆状病毒表达PCV衣壳蛋白作为ELISA抗原，提高了HRP标记的二抗的稀释倍数，降低了背景的非特异性。林彦星等[4]应用原核表达的PCV-2 Cap蛋白建立了间接ELISA。张晓勇等[5]利用巴斯德毕赤酵母高效表达PCV-2-ORF2基因编码蛋白建立了。 |
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