|
三、诊断方法
马立克氏病的诊断方法主要有临床诊断、病理切片诊断、免疫学检测方法和分子生物学方法。实验室鉴别诊断方法依赖于病毒分离、特异性抗体的检测和肿瘤组织的病理学检查。
（一）病理切片检查
病理切片检查是最常见的马立克氏病诊断方法,通过把病理组织块用石蜡包埋，切片，HE 染色，光镜下观察病理组织变化。病理切片检查主要观察神经型和内脏肿瘤型的明显变化。
1．神经型。较粗大的外周神经如坐骨神经等可见明显肉眼变化，表现肿胀、苍白如水煮样，横纹消失。病变神经可比正常者变粗2~3倍。镜下变化有2种细胞，一类是炎性细胞，主要是T细胞；另一种是肿瘤细胞亦即增生细胞。
2．内脏型。剖开腹腔可见各脏器发生的肿瘤，以肝、脾、卵巢为最常见，其次是肾、心、肠、肺等器官组织。其中法氏囊的变化具有见证病的作用，马立克氏病肿瘤细胞出现在法氏囊滤泡间。
（1）心脏。心肌纤维颗粒变性、水泡变性。在血管周围、肌纤维间、心外膜下有淋巴细胞呈浸润性增生。肌纤维脂肪变性，局部蜡样坏死。
（2）脾脏。鞘动脉周围、淋巴小结出现大量淋巴细胞、网状细胞。淋巴细胞核碎裂、边集，并见核分裂相。
（3）肝脏。肝细胞颗粒变性、水泡变性、部分坏死。窦周隙狭窄，散在少量的红细胞和淋巴细胞，狄氏隙扩张。中、小淋巴细胞、网状细胞在静脉周围浸润。增生灶内有呈空泡状的原始网状细胞和核边集的凋亡淋巴细胞。肝细胞坏死处有淋巴细胞集聚。
（4）肾脏。肾小球体积增大，肾小囊腔狭窄，并有血红蛋白样物质。肾小囊壁上皮细胞肿胀。局部肾小球萎缩，出现代偿性增大。肾小管上皮细胞从颗粒变性、水泡变性到细胞坏死、胞膜破裂，整个肾小管呈均质红染。肾小管内有血红蛋白样物质，呈尿管型。
（5）坐骨神经。神经纤维间水肿液内散在中小淋巴细胞及浆细胞，局部灶性增生。
（6）卵巢。皮质和髓质见有结节性或弥漫性网状细胞、淋巴细胞集聚，淋巴细胞核显分裂相，局灶性增生细胞排列呈涡旋状，部分卵泡全部被多形态淋巴细胞所代替。
肿瘤可以是明显局灶性的，也可以是弥漫浸润性的。灶性肿瘤呈灰白色，细腻、表面平滑、有光泽，坚实。弥漫性肿瘤则使组织红肿透白，呈大理石状。由于肿瘤而使组织器官肿大2倍或更多，特别是肝脏肿瘤很易引起肝破裂而发生腹腔出血，内有大量没有凝固的血水。此外还有非肿瘤性病变，即内脏变性萎缩。
马立克氏病肿瘤细胞浸润呈多形性，含有从小到大的淋巴细胞混合群。典型的马立克氏病神经病变有两种类型，一是脱髓鞘作用和神经鞘瘤细胞增生；二是轻度到中度的浆细胞和小淋巴细胞弥散性增生。
（二）免疫学检测
马立克氏病病毒（MDV）的免疫学检测方法主要包括琼脂免疫扩散、间接荧光抗体、ELISA等。
琼脂免疫扩散试验：是利用可溶性抗原与可溶性抗体在含有电解质的琼脂网状基质中向四周自由扩散，由近及远形成浓度梯度的原理而进行的。当抗原和抗体在琼脂基质中适合比例下相遇，便可相互结合，产生抗原抗体复合物，出现肉眼可见的沉淀线，此种沉淀反应称为琼脂免疫扩散。该法可用已知抗原沉淀未知抗体，也可用已知抗体测定未知抗原，具有高度特异性。具体方法是在琼脂平板孔内加入马立克阳性血清，在孔周围2 cm处均匀插入羽毛囊。放入37℃恒温箱中24 h观察结果。经24 h后观察：琼脂板外周孔和中心孔之间是否形成沉淀线。
琼脂免疫扩散试验的作用有：①检测是否感染过马立克氏病毒（有无抗体）；②说明是否带毒；③在有典型症状和病变的情况下可以确诊。
除此以外还有荧光抗体试验和ELISA 方法。这些方法有一定特异性，但又会受到交*抗原的干扰，荧光抗体试验和ELISA方法比琼脂免疫扩散试验更敏感一些。
|
