兽医战略
猪细小病毒病研究进展
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3.免疫荧光抗体检测方法。取疑似病猪的扁桃体、死胎、木乃伊胎，将其做成冰冻切片，用荧光抗体诊断液染色待检细小病毒标本片：将染色标本片置湿盒中，放入 37℃培养箱作用 30 min ，取出用 PBS（pH 值 7.2～7.6） 冲洗和漂洗 15 min，中间需换液 1 次。再用中性蒸馏水冲洗除盐，待标本片自然干燥后，滴加磷酸甘油，盖上洁净的盖玻片，放于荧光显微镜下观察。发现细胞内有亮绿色荧光颗粒集结，而对照无荧光颗粒集结，可判定为阳性。该方法可靠、敏感。 4.ELISA检测方法。刘俊辉等等采用差速离心、透析、聚乙二醇浓缩纯化 PPV制备抗原，建立检测 PPV 血清抗体的间接 ELISA方法。通过对400多份样品的分析，该方法特异性强，易于操作，对于大量血清检测具有省时、便捷、准确的特点，更适应规模化养殖的早期诊断和紧急预防的需要。但是该方法还没有实现检测的标准化。 5.血清中和检测方法（SN）。该方法的原理是利用被检血清的抗体中和 PPV，然后根据培养细胞的病变情况来计算血清抗体的滴度。该方法的优点是特异性强，但是操作比较繁琐，特别是当病毒低剂量时不引起细胞病变，限制了该方法的检测过程。 6.PCR检测方法。李明凤等利用 PCR扩增出猪细小病毒VP2保守区基因194 bp 片段，并克隆到pGEM T载体上，纯化质粒作为 PCR检测的标准模板 ，以10倍梯度稀释质粒为标准模板，进行 SY BR GreenⅠ荧光定量 PCR扩增并制作标准曲线，建立了猪细小病毒的荧光定量 PCR检测方法，该方法检测灵敏度可达 1.0 ×102拷贝/μl。赵灵燕等使用PCR扩增出猪细小病毒VP2基因片段后，经过反应条件优化、特异性、敏感性实验建立了猪细小病毒的PCR检测方法，并对118份样品进行了检测。陈进会等基于猪瘟病毒( CSFV) 、伪狂犬病毒( PRV) 以及PPV基因组的保守序列，分别设计了互补的3对引物，可从人为混合的样品中同时检测到 3 种病毒。结果该方法可检测 14.5 的 CSFV、 1 的 PPV 以及 31.4的 PRV的核酸模板。 7.核酸探针技术。Krell等应用核酸探针技术对PPV进行诊断, 结果最低可检出 0.1 的 DNA。侯喜林等使用地高辛标记的猪细小病毒核酸探针检测PPV病毒，可检出PPV最小量为 40 的 DNA。该技术的优点是快速、特异性强，灵敏度高。 六、防控措施 基于目前并没有有效的治疗方法，因此建议种猪场采取“预防为主”的方法。 （一）预防方法 1.坚持自繁自养，引进种猪隔离饲养半个月，经过2次血清学检查，效价在 1：256 以下或为阴性时，再合群饲养。 2.初产母猪一般在9月龄以后配种，以便大多数处女母猪提高主动免疫能力。 3.在母猪产前注射土霉素或饲喂四环素族，能有效防止母猪发病，并对仔猪起到预防作用。 （二）免疫接种 初产母猪在配种前通过自然感染或人工免疫接种获得主动免疫。目前主要有灭活油乳剂疫苗和弱毒疫苗。灭活疫苗在后备母猪配种前 2 个月左右注射，可预防本病发生。仔猪母源抗体的持续期为 14～24 周，在抗体效价大于 1∶80 时可抵抗猪细小病毒的感染。如果效价降低达不到要求时，必须加强免疫。 （三）治疗方法 可肌内注射青霉素160 万～240万单位、链霉素100万单位，每天2次，连用3 d。也可使用双黄连注射液，每千克体重0.2 ml，加倍健和倍康肽混合肌注，每日1次，同时每日肌注1次头孢噻呋钠注射液，每千克体重5 mg，连用3～4 d。不食者，每天下午加注复合维生素B注射液1次，连用2 d。饮用电解质多维（200 g兑水1吨）加葡萄糖（200 g兑水1 吨）加溶菌酶或黄芪多糖粉（400 g兑水1吨），连续饮水7 d。 另外，平时应加强猪舍的卫生管理，对病猪的排泄物、污染物及死胎和胎衣热处理或火化。猪舍周围应用3%的次氯酸钠或5%的苛性钠消毒，做好防疫管理与疫病监测，做到进行引种控制，综合以上方法，可以有效的防止PPV的入侵。 参考文献(略) |