良种繁育
牛羊的胚胎移植技术
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冷冻保存的胚胎，解冻时也应采取缓慢升温的方式。由-196℃升至-50℃可不必控制温度，随后按每分钟4～5℃升至-10℃，最后直接升温于室温。解冻后必须把二甲基亚砜清除掉，方法是使胚胎按相反方向依次通过上述有不同二甲基严砜浓度的培养液。最后移至不含和供体母羊一起做同期发情处理，使二者的发情时间相同或相近。移植胚胎的方法同样是在受体腹中线适当部分切开，找到排卵一侧的卵巢，如黄体发育良好，将胚胎注射到同侧子宫角上端或输卵管壶腹内。 一、超数排卵 促卵泡素能促卵泡发育，促黄体素能引起排卵，使用有这些功能的促性腺激素类似物处理繁殖母羊，使其在未经处理时每个情期中只排1～7个卵的基础上增加排卵数量，这就是超数排卵技术，简称超排。超数排卵处理可使母羊在一个情期内排出20个卵，个别母羊可高达50个卵。超数排卵的目的在于输精后能获得较多的受精卵，受精卵即可移植形成新的个体，因此在山羊生产中，超数排卵只是胚胎移植中的环节之一。 促使母羊超排的最佳时间在发情周期的第十二三天，在羊颈静脉注射促卵泡素200～300国际单位，静脉注射促黄体素100～150国际单位可获得超排效果。还可以使用促卵泡素的类似替代物孕马血清和促黄体素的类似替代物绒毛膜促性腺激素（HCG），同样在母羊发情周期的第十二三天，根据体重大小皮下注射孕马血清600～1100国际单位，出现发情后再注射绒毛膜促性腺激素500～700国际单位。如果没有孕马血清的制成品，可采妊娠50～90天期间的孕马全血注射，一般每毫升孕马全血含有50～200国际单位孕马血清，由此可以推算全血用量。 二、胚胎移植技术 胚胎移植技术和人工授精的技术环节相似，不过操作的对象是胚胎而不是精子。包括供体和受体母羊的准备、胚胎的收集、检查、培养保存和移植等几个技术环节。 1、供体和受体母羊的准备 首先选择好供体和受体母羊，并同时进行同期发情处理，供体母羊发情后用良种公羊交配或人工授精2～4次，以保证卵子有较高的受精率。供体和受体母羊均应有较好的饲养管理条件，最好单圈饲养，在移植胚胎的前一天最好禁饲，造成空腹，便于手术的进行。 2、胚胎的收集 配种后3～8天内对供体母羊施行外行科手术，在腹中线适当部位切开取出输卵管，从子宫角上端注射生理盐水或若干等渗生理缓冲液（简称冲洗液），并将冲洗液挤入子宫-输卵管连接部，在输卵管伞部插入直径2.5毫米的塑料管，用镊子固定输卵管，将冲洗液沿子宫-输卵管倒挤出来，用表面皿收集液体和胚胎。 3、胚胎的检查 收集到试管中的冲卵液，需静置10分钟，待胚胎下沉后，移去上层液，将底部少量液体移植于表面皿内再行检查。用解剖镜先放大10～20倍，检查胚胎的数量，继而放大到50～100倍，观察胚胎的发育情况。正常发育的胚胎外形整齐，大小较一致，分布均匀，外膜完整。通过检查，将确定发育正常的胚胎收集到注射器或专用移植管内，供作移植。在移植到受体之前，胚胎应保持在不低于25℃的环境温度下，最好是在37℃的恒温条件下。 4、胚胎的保存 胚胎在培养液中，如放在室温条件下，只能存活10～20小时，试验表明羊胚在5℃可存活数日，需长期保存的胚胎应采用冷冻保存，方法如下：在培养液添加防冻保护剂二甲基亚砜（DMSO），胚胎在冷冻前需先依次经过，含有0.25摩尔/升、0.5摩尔/升、0.75摩尔/升、1摩尔/升、1.25摩尔/升和1.5摩尔/升数种不同浓度二甲基亚砜的培养液，每种浓度停留7～10分钟，在最后一种浓度中降温冷冻。胚胎冷冻时必须采取缓慢控制降温。由室温降至-7℃，每分钟降1℃，在降至-7℃时，进行诱发结冰处理，然后按每分钟0.3℃的速度降至-36℃，随后以更慢的速度（每分钟0.1℃）降至-60℃。此后可直接浸入液氮保存。 |
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