兽医考试
执业兽医考试《动物生物化学》复习资料
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（二）tRNA和解码系统 反密码子：每种tRNA的反密码子，决定了所带氨基酸能准确的在mRNA上对号入座 。反密码子与mRNA的第三个核苷酸配对时，不严格遵从碱基配对原则 。 （三）rRNA和蛋白质生物合成的场所 rRNA与蛋白质一起构成核糖体——蛋白质合成“工厂”。核糖体上有三个功能位点：P位点，起始氨基酰-tRNA或肽酰-tRNA结合的部位；A位点，内部氨酰-tRNA结合的部位；E位点，P位点心空载的tRNA分子释放的部位 第十五单元 基因表达的调节 一、原核生物基因表达调控 1．操纵子模式调节 操纵子指原核生物基因的一个表达调控序列或功能单位。包括参与同一代谢途径的几个酶的基因，编码在一起形成一个特殊单位（统称结构基因）与结构基因前面的调节基因、操纵基因以及其它的一些调控序列。控制部位由调节基因、启动子和操纵基因组成。当代谢需要结构基因表达时、操纵子即开放，结构基因转录生成mRNA并进一步表达酶参与代谢。如果不需要时，结构基因不被转录，或以很低的速度进行转录。 乳糖操纵子 ：乳糖操纵子是典型的诱导型操纵子。 第十六单元 核酸技术 它是以限制性核酸内切酶和DNA连接酶的发现为基础的DNA重组技术。其主要特点，一是在体外DNA水平上操作，二是目的基因在宿主体内的细胞水平上表达。 一、核酸工具酶：常用的有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、碱性磷酸酶和DNA聚合酶等。限制性核酸内切酶能识别DNA分子中特定的核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构，切割后可在切口处留下具有互补关系的单股DNA，称粘性末端。 二、基因载体：是携带外源DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具，其本身是DNA。载体可分为克隆载体、穿梭载体、表达载体。常用的载体有质粒、噬菌体和病毒载体。 四、DNA重组的基本技术路线 DNA重组技术的基本过程包括目的基因的制备、DNA重组、DNA重组体的转化、重组体的筛选、外源基因的表达等步骤。 DNA重组技术的本质是基因的体外重组，又称为“基因工程”或“分子克隆”，其基本过程可分为四个阶段： 1．选择人们期望的外源基因，称目的基因。 2．将目的基因和适合的载体DNA（如质粒）在体外进行重组，以获得重组体（杂交DNA）。连接的方式主要有黏性末端连接、平端连接、定向克隆、人工接头连接和多聚核苷酸连接等。 3．将重组体转入合适的生物活细胞，使目的基因复制扩增、或转录，翻译表达出目的基因编码的蛋白质。 4．从细胞中分离出基因表达产物或获得一个具有新遗传性状的个体。主要方法有核酸杂交、免疫学筛选、翻译筛选和物理筛选等。 五、基因操作的主要技术 （一）核酸分子杂交：主要南印迹杂交（Southern-blot）和北印迹杂交（Northern-blot）. 南印迹杂交（Southern-blot）:是将在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，变性后，通过与标记的单链DNA或RNA探针杂交作用，以检测被转移DNA片段中特异的基因。 北印迹杂交（Northern-blot）：是将RNA分子从电泳凝胶转移并结合到适当的滤膜上，通过与标记的单链DNA或RNA探针杂交，以检测特异基因的表达。 （二）、PCR技术，其又称聚合酶链式反应。 PCR是一种快速的DNA特定片断，体外合成扩增技术，其过程包括：双链DNA的高温变性，引物与模板低温退火和适宜温度下的引物延伸三个步骤反应循环。每一循环中新合成的子链及其模板均作为下一循环的模板，于是特定的DNA序列的产量随着循环次数成指数增长。 该技术现已成为分子生物学、医学、生物工程、法医学及考古学等领域不可缺少的工具。 （三）、转基因技术 转基因技术是一种特定的外源基因转移表达的基因工程技术。自1982年首次将大白鼠生长激素基因放在质粒中，用注射的方法注入小鼠受精卵核中而被表达，使成熟的小鼠体重显著增加，而称为转基因的“硕鼠”或“超级鼠”以后，国内外出现了各种各样的转基因动物、植物及由转基因动物产生的转基因药物、转基因食物等。这种技术还有待进一步成熟。 |
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