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磺胺类药物残留检测技术
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1、技术简介 磺胺类药物（Sulfonamides, SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。SAs种类可达数千种，其中应用较广并具有一定疗效的就有几十种。通过任何途径摄入的SAs会在人体中蓄积，导致许多细菌产生抗药性，对人类的身体健康产生很大的危害。国际食品法典委员会（CAC）和欧美等大多数国家规定食品和饲料中的SAs总量及磺胺二甲基嘧啶等单个SAs的含量不得超过0.1毫克/千克。日本规定食品中不得检出SAs。 本技术用于检测可食性动物组织中七种常见的SAs。可食性组织样品经乙腈提取，正几烷分配，再经碱性氧化铝SPE柱净化，用反相高效液相色谱-紫外检测器在270nm检测。可靠的方法检测下限为0.05毫克/千克，样品处理过程简单、快速、灵敏，易于掌握。 2、应用条件 本项技术应用范围是在实验室里对可食性动物组织（肉、肝、肾、脂肪、皮等）中七种或单个SAs（磺胺嘧啶SD、磺胺间甲氧嘧啶SMM、磺胺间二甲基嘧啶SM2、磺胺间甲恶唑SMZ、磺胺二甲氧嘧啶SDM、磺胺间恶喹啉SQ、磺胺间甲氧嘧啶SMM、磺胺甲氧嗪SMP）的高效液相色谱测定方法。实验室须具备高效液相色谱仪（带紫外检测器）以及实验室常见的小型样品处理设备和试剂。同时具有一定分析化学专业知识背景、并能够比较熟练操作仪器设备的技术人员。 3、工艺流程 样品制备 -----> 解冻 -----> 粉碎 ------> 均分 样品处理 -----> 提取 -----> 净化-----> 浓缩-----> 溶解 样品检测 -----> 参数设定 ----->进样 -----> 数据处理 4、操作规程 4.1试剂和材料 4.1.1试剂：甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；正己烷（分析纯）；正丙醇（分析纯）；磷酸（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；碱性氧化铝SPE柱；磺胺药物标准品（大于99%）； 4.1.2设备：高效液相色谱仪，配紫外检测器；涡动混合器；离心机；电子天平；旋转蒸发仪；震荡器；组织匀浆机。 4.2提取 准确称取5.00克组织样品匀浆物，置于50mL聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠4.0克和乙腈25mL,匀浆后，以3000r/min的速度离心5min。分离后的残渣再加入25mL乙腈，震荡10min后，以3000r/min的速度离心5min。合并两次上清液，加入30mL 正己烷，震荡10min后，以3000r/min的速度离心5min，取下层液体置于鸡心瓶中，加入10mL正丙醇, 混合后50℃下减压干燥，用3mL乙腈-水（95+5,v/v）溶解残留物。 4.3净化 上述样品通过碱性氧化铝SPE柱，不收集，用5mL乙腈-水（95+5,v/v）洗涤鸡心瓶，过SPE柱，吹去柱内滞留的液体。用10mL乙腈-水（70+30，v/v）洗脱后，洗脱液中加入5mL正丙醇，50℃下减压干燥后，残留物用2.0mL流动相溶解，用高效液相色谱仪进行检测。 4.4检测 4.4.1检测条件： 色谱柱：C18柱，250mm╳4.6mm i.d.； 流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）； 流速：1.0mL/min； 检测波长：270nm； 进样量：20mL； 4.4.2样品测定： 分别取适量的标准溶液和试样溶液，做单点或多点校准，以色谱峰面积定量。标准工作液和试样中SAs类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样液测定的过程中要参插注入标准工作液，以便准确定量。 4.4.3空白实验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 4.4.4计算 按下式计算试样中SAs类药物残留量： C ╳ V X = —————— M 式中：X——试样中SAs残留量（mg/g）； C——试样液中对应的SAs浓度（mg/mL）； V——试样总体积（mL）； M——组织样品重量（g）。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留小数点后两位。 |